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目的：本研究筛选了p53基因状态不同的两种人肺腺癌细胞系，以复制缺陷型重组腺病毒为载体，将野生型p53基因cDNA分别导入这两种细胞，并在细胞内获得表达后，观察p53基因的放射增敏作用，并探讨其机制，为临床开展基因放射治疗提供实验依据。 方法：本实验分为三部分。第一部分选取人肺腺癌细胞系A549及GLC-82细胞，通过免疫组化法检测内源性P53蛋白的表达、继而通过PCR-SSCP方法检测细胞中内在p53基因的状态。第二部分以携带外源性野生型p53基因cDNA及绿色荧光蛋白(GFP)基因的复制缺陷型重组体腺病毒为载体，将外源性wtp53分别转入这两种细胞内，通过绿色荧光蛋白及P53免疫组化检测，观察转染效率及外源性基因在细胞内的表达，并选择最佳转染滴度；以含半乳糖苷酶的复制缺陷型腺病毒空载体(Ad-LacZ)为对照，绘制细胞生长曲线，观察wtp53对两种细胞系生长的影响。第三部分以Ad-p53转染两种细胞后，分别给予OGy、2Gy、4Gy不同剂量照射，测定集落形成率，并应用流式细胞仪技术检测外源p53基因对照射后细胞周期及凋亡的影响，应用SPSS10.0统计软件包对结果进行分析。 结果：Ad-p53转染前A549细胞免疫组化染色呈阳性表达，GLC-82细胞呈阴性表达，PCR-SSCP结果提示GLC-82细胞存在p53基因第七外显子突变。转染后24小时A549细胞免疫组化染色阳性表达增强，GLC-82细胞由阴性表达转为阳性，表明wtp53在细胞内成功的表达。绿色荧光蛋白检测显示100MOI腺病毒载体转染后16小时可达70-80％表达，转染效率高，以100MOI为最佳转染滴度。细胞生存曲线显示Ad-p53对两种细胞系体外生长均有抑制作用，而对GLC-82细胞抑制作用强于A549细胞。两种细胞转染Ad-p53并给予不同剂量照射后的集落形成能力明显下降，随着剂量的增加，下降更为明显；在同一照射剂量下，转染Ad-p53组细胞的集落形成能力最低。单独照射或单独转染Ad-p53都可以使细胞周期阻滞于G1期并使凋亡指数增高，Ad-p53结合放疗组的作用更为明显，各组之间有极显著性差异(p＜0.001)；分析Ad-p53加照射组的G1期阻滞与凋亡指数 硕_卜研究生学位论文发现二者呈正相关，表明Ad一p53对放射的增敏作用是通过Gl期阻滞并诱导凋亡而实现的，而且这一作用不依赖于内源p53基因的状态。 结论:研究结果表明腺病毒载体可有效的将外源Wtp53基因转入人肺腺癌细胞，wtp53可以抑制肺腺癌细胞的恶性生长，在体外结合放射可以提高肺腺癌细胞的放射敏感性，其机制在于wtp53可使细胞周期阻滞于Gl期，并促进放射诱导的凋亡;wtp53的放射增敏作用不依赖于细胞内源p53基因状态。