为用基因重组技术表达β hCG避孕疫苗抗原，构建在酵母细胞中表达的重组质粒β hCG-pPIC9K，转化嗜甲醇酵母并进行表达实验研究。根据β hCG的cDNA序列设计两条引物，使上游带EcoR I酶切位点，下游带Not I酶切位点，以质粒βhCG-PBS KS为模板，进行PCR扩增反应；将所得的DNA片段经EcoR I和Not I双酶切后用T4连接酶与pPIC9K质粒进行连接，然后导入大肠杆菌DH5 α，用PCR法筛选阳性克隆并用双酶切鉴定重组质粒β hCG-pPIC9K。再用电打孔法转化酵母（Pichia pastoris），用缺组氨酸的MD平板筛选阳性株并在含G418的YPD培养基中筛选多拷贝插入菌株。用甲醇诱导表达，选择表达的条件（甲醇浓度和表达时间）。 我们用所设计的引物扩增出两端分别带EcoR I和Not I酶切位点的β hCG DNA片段，插入pPIC9K并导入DH5 α获得阳性克隆，经PCR反应和双酶切鉴定表明重组质粒是βhCG-pPIC9K，测序结果表明目的基因β hCG已成功克隆到载体pPIC9K上。转化嗜甲醇酵母获得耐受4mg/ml G418的菌株，并诱导其分泌表达目的蛋白，发现甲醇浓度为0.5％、连续诱导4天得到的蛋白表达量较高。经SDS-PAGE电泳分离得到的蛋白条带在Westernblot检测中能与兔抗hCG的抗血清发生反应。实验结果表明我们构建的重组质粒β hCG-pPIC9K已在嗜 甲醇酵母（Plchl Pasto。IS）中获得表达。