研究目的:本课题通过建立人成骨细胞体外培养实验模型，从细胞及分子水平上观察葛根素对人成骨细胞凋亡的影响，探讨葛根素防治骨质疏松症的作用机制，为葛根素应用于临床防治骨质疏松症提供实验依据。　　方法:①对购买的已鉴定的人成骨细胞进行复苏、传代、培养及冻存为下一步实验做好准备;②以雌激素（10μM）干预为阳性对照，用ELISA观察不同浓度(0，10-10M，10-9M,10-8M,10-7M,10-6M)葛根素对体外培养的hOBs凋亡的影响;③TUNEL法检测10-8M葛根素干预后对hOBs凋亡的影响;④Western blot检测不同浓度(0，10-9M，10-8M，10-7M)葛根素对hOBs细胞内Bcl-2及Bax蛋白表达的影响;⑤观察葛根素对hOBs细胞凋亡过程中的ERK信号通路的活化过程的影响;⑥体外应用ERK抑制剂PD98059干预离体培养细胞内的ERK信号转导通路，ELISA进一步检测葛根素对hOBs细胞凋亡的作用;⑦应用雌激素受体抑制剂ICI182780预处理hOBs细胞，ELISA检测葛根素对hOBs细胞凋亡的影响。　　结果:　　1.葛根素能显著抑制饥饿诱发的细胞凋亡。其中10-10M干预时ELISA吸收光密度为2.23±0.14，10-9M为1.89±0.16，10-8M为1.54±0.13,10-7M为1.62±0.15，10-6M为1.58±0.12，均显著低于正常对照组2.51±0.11(allp＜0.05)，但较雌二醇干预的阳性对照组高(allp＜0.05)。不仅如此，10-9M葛根素对细胞凋亡的抑制作用显著高于10-10M浓度组(p＜0.05)，而浓度达10-8M时，葛根素的细胞保护作用达最大值，明显高于10-10M、10-9M及10-7M组(all p＜0.05)，但与10-6M浓度组差异并不显著。10-8M葛根素干预后TUNEL阳性细胞数较饥饿对照组显著下调(p＜0.05)。　　2.与对照组相比，不同浓度葛根素均能显著上调Bcl-2的蛋白表达(p＜0.05)，但明显抑制细胞内Bax的蛋白表达水平(p＜0.05)，差异具有统计学意义。不仅如此，10-8M葛根素干预后对Bcl-2及Bax表达的影响显著高于10-9M组(p＜0.05），但较10-7M明显降低(p＜0.05)。Bax/Bcl-2是评价细胞凋亡的另一重要指标，我们将对照组Bax/Bcl-2的比值定为1，10-9M葛根素干预组为0.39，10-8M干预组为0.19，10-7M干预组Bax/Bcl-2比例为0.08。　　3.与对照组相比，葛根素干预5min后体外培养的hOBs内ERK磷酸化水平显著上调(p＜0.05)，至15min后，ERK磷酸化水平进一步升高，至45min时达顶峰，不同时间点组间差异显著(allp＜0.05)。　　4.葛根素+PD98059干预组细胞ELISA吸光度值（2.40±0.10）显著高于单纯葛根素干预组(1.54±0.13)(p＜0.05)，差异具有统计学差异。而PD98059干预组细胞ELISA吸光度值(2.43±0.15)与对照组(2.51±0.12)及葛根素+PD98059干预组并无显著性差异。　　5.ER抑制剂ICI182780预处理葛根素干预的hOBs细胞，结果证实葛根素+ICI182780干预组细胞ELISA吸光度值（2.52±0.15）显著高于单纯葛根素干预组（1.54±0.13）(p＜0.05），而ICI182780干预组细胞ELISA吸光度值(2.51±0.10)与对照组（2.51±0.12）及葛根素+ICI182780干预组无显著性差异。　　结论:　　1.葛根素能抑制体外培养的人成骨细胞凋亡，其最适浓度为10-8M;　　2.葛根素能上调抗凋亡蛋白Bcl-2，同时下调促凋亡蛋白Bax的表达发挥细胞保护作用;　　3.葛根素通过激活ERK信号通路实现抑制hOBs细胞凋亡的作用;　　4.雌激素受体参与了葛根素对hOBs保护作用的调控过程。