背景:肺癌是全世界范围内癌症死亡的最主要原因之一。在我国每年大约有60万人因为肺癌而死亡。这种较高的死亡率主要归因于该疾病的不良预后。发现诊断晚,不同组织分型的异质性,以及对该肿瘤发生发展的分子机制认识的不足都是其不良预后的关键因素。非小细胞肺癌(NSCLC)大约占全部肺癌的80%。深入探讨NSCLC发生发展过程中的分子作用机制,对NSCLC的诊断、治疗和预后的改善都有着十分重要的临床意义与价值。MicroRNAs(mi RNAs)作为一类新的癌基因或抑癌基因,其表达失衡与多种肿瘤的发生、发展密切相关。近年来,miRNAs与NSCLC发病的关系正越来越受关注,已证实miR-128、mi R-195、miR-483、mi R-451、miR-630等参与了NSCLC的发生、发展和预后密切相关。课题组前期研究发现包括miR-182在内的Micro RNAs在肺癌细胞系中异常表达,可能在肺癌的发生、发展中有重要作用。目的:观察miR-182在NSCLC患者血浆和组织中的表达及其生物学意义,并通过对其靶基因抑癌因子RECK的鉴定,阐明其在NSCLC的增殖、侵袭与转移侵袭和转移中的作用。旨在为深入探讨NSCLC的发生机制提供新的线索,为筛选NSCLC新的生物标志物和治疗靶点提供新的思路。方法:1.实时荧光定量PCR(q RT-PCR)检测NSCLC细胞系、配对的30例NSCLC癌组织和癌旁正常肺组织样本、50例NSCLC患者与30例正常健康者的血浆中mi R-182的表达水平,比较分析NSCLC癌组织和正常组织中mi R-182的表达差异、NSCLC患者与正常健康者的血浆中mi R-182的表达水平的差异。整理NSCLC患者的相关临床资料,并结合临床数据分析mi R-182的表达水平与NSCLC患者组织的分化程度、病理类型、淋巴结转移以及TNM分期的关系。2.在NSCLC细胞株A549和H1299中过表达mi R-182后,测定细胞增殖,侵袭和转移能力。构建荧光素酶载体(p MIR-RECK)(含有mi R-182结合位点的RECK的3’UTR片段),双荧光素酶活性实验鉴定RECK是mi R-182的靶基因。在A549细胞系中,过表达miR-182 mimics和inhibitors,检测RECK和MMP9的蛋白表达水平。qRT-PCR检测30例配对的NSCLC癌组织和癌旁正常肺组织样本中的RECK的表达水平。最后分析NSCLC癌组织和正常组织中RECK的表达差异及其与miR-182表达的相关性。结果:MiR-182在A549、H1299、PC9和NCI-H460四种肺癌细胞系中的表达显著高于胎儿肺成纤维细胞系MRC-5。30例NSCLC患者癌组织中miR-182显著高表达于癌旁正常肺组织(P<0.05),且有淋巴结转移患者中mi R-182的表达水平显著高于无淋巴结转移患者(P<0.05)。NSCLC患者血浆中mi R-182的表达水平显著高表达于正常健康者血浆中miR-182的表达水平(P<0.05)。NSCLC患者血浆mi R-182的表达水平与NSCLC患者的年龄、性别、肿瘤的分化程度、以及肿瘤的病理类型无统计学差异(P>0.05)。血浆miR-182的表达水平与NSCLC患者的淋巴结转移和TNM分期差异有统计学意义(P<0.05)。在NSCLC细胞株A549和H1299中过表达mi R-182后促进了NSCLC细胞系的增殖,侵袭以及迁移(P<0.01)。共转染miR-182和RECK3’UTR WT组的荧光素酶活性与其他3组相比显著降低(P<0.05),证实miR-182对pMIR-RECK3’UTR表达有抑制作用,且发挥该抑制功能是通过mi R-182与pMIR-RECK 3’UTR区结合实现。MiR-182模拟物显著下调了A549细胞中RECK的mRNA(P<0.05)和蛋白的表达;MiR-182抑制物显著上调了A549细胞中RECK的m RNA(P<0.05)和蛋白的表达。RECK在NSCLC癌组织中的表达水平显著低于癌旁正常肺组织(P<0.001),RECK的表达水平与miR-182的表达水平呈负相关(r=-0.482,P<0.01)。结论:NSCLC患者血浆中mi R-182的表达水平显著高表达于正常健康者,且与NSCLC患者的淋巴结转移和TNM分期相关且成正相关。提示miR-182可以用作预测NSCLC预后的肿瘤生物标志物。MiR-182能够增强NSCLC细胞系的增殖,侵袭以及迁移能力,这种作用是通过负调控RECK信号通路而实现的。