【摘 要】
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水貂养殖生产实践中,褪黑激素（MLT）广泛应用于毛皮成熟,由于种貂资源的短缺,埋植MLT的水貂逐步用做种貂,发现其提前表现出与正常发情相一致的外观发情特征,而决定外在发情表现的内在因素如卵巢和卵泡的发育、生殖激素的分泌以及基因表达的情况鲜有报道。本研究对比埋植MLT和未埋植MLT水貂血清MLT和主要生殖激素含量的差异,以及卵巢形态学和卵泡发育情况的差异,同时对两组卵巢进行转录组分析,以期筛选MLT
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水貂养殖生产实践中,褪黑激素（MLT）广泛应用于毛皮成熟,由于种貂资源的短缺,埋植MLT的水貂逐步用做种貂,发现其提前表现出与正常发情相一致的外观发情特征,而决定外在发情表现的内在因素如卵巢和卵泡的发育、生殖激素的分泌以及基因表达的情况鲜有报道。本研究对比埋植MLT和未埋植MLT水貂血清MLT和主要生殖激素含量的差异,以及卵巢形态学和卵泡发育情况的差异,同时对两组卵巢进行转录组分析,以期筛选MLT影响卵巢发育的候选基因,为从分子水平探究MLT影响水貂卵巢发育的机制提供依据,为MLT能否应用于水貂繁殖提供理论参考。试验随机选取未埋植MLT（对照组）和埋植172 d MLT埋植剂（18 mg/只）（试验组）的水貂各4只,一是采集心脏血液样本,检测血清MLT及促卵泡素（FSH）、促黄体生成素（LH）、雌激素（E2）和孕激素（P4）的含量;二是采集MLT埋植剂,检测其MLT含量;三是采集卵巢样本,将左侧卵巢进行形态学测定后制成切片,测定各级卵泡和卵母细胞的直径及透明带厚度,将右侧卵巢进行总RNA提取后构建c DNA文库,然后用Illumina平台进行测序,将测序结果进行生物信息学分析,包括SNP分析、可变剪切分析和差异基因分析,对差异基因进行GO功能分类和KEGG通路注释,利用实时荧光定量PCR（q PCR）对随机筛选的差异基因进行验证,筛选与卵巢发育相关的候选基因。结果表明,试验组与对照组相比:（1）除P4含量差异不显著外（P＞0.05）,FSH含量极显著增加（P＜0.01）、LH、E2含量显著增加（P＜0.05）;MLT含量极显著增加（P＜0.01）。（2）除卵巢宽径差异不显著外（P＞0.05）,长径、厚径、体积和重量均极显著增大（P＜0.01）,可视卵泡数量显著增多（P＜0.05）;原始卵泡、初级卵泡的数量均极显著增多（P＜0.01）,且有发育完好的三级卵泡和成熟卵泡,但次级卵泡数量、各级卵泡和卵母细胞的直径及透明带厚度均差异不显著（P＞0.05）。（3）共计3 491个差异SNP位点,其中基因区SNP 317个,基因间区SNP3 174个,碱基为转换多于颠换;差异基因的可变剪切主要与SE事件有关。（4）共计206个差异基因,其中上调基因69个,下调基因137个;GO功能富集结果显示,共计7个差异基因富集于生殖过程;KEGG通路富集结果显示,共计7个差异基因富集于5条与繁殖相关的通路,包括1个未被注释的基因,富集于细胞色素P450对外来生物的代谢通路;筛选得到4个与卵巢发育相关的候选基因,均为上调基因,分别为细胞角蛋白19（KRT19）、谷胱甘肽硫转移酶Theta1（GSTT1）、5’胺基乙酰丙酸合酶1（ALAS1）、核受体亚科4A组成员1（NR4A1）。通过本研究得出以下结论:2～2.5月龄水貂于7月初埋植MLT埋植剂（18 mg/只）172 d后:（1）引起FSH、LH和E2含量的增加、卵巢体积和重量的增加以及可视卵泡、原始卵泡、初级卵泡数量的增加和有腔卵泡的提前发育,促使水貂提前发情。（2）筛选3 491个差异SNP位点,碱基为转换多于颠换;差异基因的可变剪切主要与SE事件有关;筛选得到4个与卵巢发育相关的候选基因,即KRT19、GSTT1、ALAS1、NR4A1,可能与卵巢发育有关。
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