论文部分内容阅读
目的研究Fmr1小鼠是否存在与人类脆性X综合征(FXS)患者相似的异常行为,评价是否可以作为FXS的疾病模型。方法以PCR和免疫印迹技术对Fmr1基因敲除(KO)小鼠和野生型(WT)小鼠进行基因型鉴定;HE和Go1gi染色方法分别观察2组动物睾丸和脑内树突棘形态;分别对实验动物进行听源性惊厥(AGS)观察,以水迷宫、避暗、跳台方法检测动物学习记忆水平,以旷场、高架十字迷宫和自主活动实验检测动物探索行为能力。结果WT小鼠扩增出预期约为500bp的DNA片断,KO小鼠则是800bp的DNA片断,KO小鼠无FMRP蛋白表达,树突棘长度明显增长,密度显著增加,KO雄性小鼠有巨睾征;AGS易感性比WT明显增高(P<0.05);Morris水迷宫实验的定向航行实验显示,KO小鼠的潜伏期和穿越平台次数与WT小鼠相比有明显增多(P<0.05);空间搜索实验显示,KO小鼠在目标象限停留时间明显短于WT小鼠的停留时间(P<0.05);避暗实验和跳台实验显示,KO小鼠潜伏期明显短于WT小鼠,而错误次数明显增多(P<0.05);旷场实验显示,KO小鼠在中央区域停留时间及进入次数明显多于WT小鼠(P<0.05);KO小鼠与WT小鼠相比,总运动路程明显增多,速度明显增快(P<0.05);高架十字迷宫实验显示,KO小鼠在开放臂活动时间、次数以及路程均明显多于WT小鼠(P<0.05);自主活动实验显示,KO小鼠的活动次数明显多于WT小鼠(P<0.05),而站立次数明显少于WT小鼠(P<0.05)。结论从基因型、蛋白表达谱、形态学及行为学等方面结果提示Fmrl基因敲除小鼠具有人类脆性X综合征类似的表型,可作为FXS疾病模型用于论文的后续研究,而且这些表型与FMRP表达缺失有关。目的观察柴胡桂枝汤挥发油对Fmr1基因敲除小鼠异常行为的干预。方法利用超临界CO2萃取技术制备柴胡桂枝汤挥发油并用GC-MS分析鉴定柴胡桂枝汤挥发油成分;4周龄KO及WT小鼠按处理方式的不同被随机分为药物处理组(即腹腔注射柴胡桂枝汤挥发油)、溶媒对照组(即腹腔注射植物油)及空白对照组(即不给予任何处理)。药物处理组进一步按所给浓度的不同继续分组,分别对各组动物在给药后进行避暗、跳台、高架十字迷宫、旷场、自主活动和AGS等行为学观察。结果经GC-MS分析鉴定柴胡桂枝汤挥发油含有28种组分。其中,最主要成分姜辣素占31.94%,丁香酚占18.01%,单萜类物质占12.34%,3-丁基-1(3H)-异苯并呋喃酮占9.34%,肉桂类物质占8.03%。旷场实验显示,随柴胡桂枝汤挥发油浓度的增加,KO和WT小鼠的平均速度、穿越中央格次数、总路程等逐渐降低。高架十字迷宫实验显示,KO小鼠给予柴胡桂枝汤挥发油处理后,与KO溶媒组相比,KO小鼠在开放区域活动时间、次数以及路程均降低,有显著的统计学差异(P<0.05)。自主活动实验显示,使用柴胡桂枝汤挥发油后,KO小鼠的活动次数明显减少,动物站立次数明显增多(P<0.05);跳台实验显示,柴胡桂枝汤挥发油处理后,KO小鼠潜伏期和错误次数有明显改善(P<0.05),WT小鼠潜伏期和错误次数有较少改善。避暗实验中,柴胡桂枝汤挥发油处理后,KO小鼠潜伏期延长(P<0.05),错误次数减少(P<0.05),WT小鼠潜伏期和错误次数无明显改善(P>0.05)。听源性惊厥实验中,随柴胡桂枝汤挥发油浓度的增加,KO小鼠的AGS的潜伏期延长,发作程度降低(P<0.05),1.5mg/g浓度的柴胡桂枝汤挥发油能完全抑制AGS的发生。结论柴胡桂枝汤挥发油可以改善KO小鼠AGS和运动过多的发生,改善学习记忆能力,对KO小鼠的异常行为有一定治疗作用。目的初步探讨柴胡桂枝汤挥发油干预Fmrl基因敲除小鼠听源性惊厥的可能机制。方法4周龄KO及WT小鼠按处理方式的不同被随机分为药物处理组(即腹腔注射柴胡桂枝汤挥发油)、溶媒AGS组、溶媒对照组和空白对照组,进一步将药物处理组和溶媒AGS组给予AGS诱发,溶媒对照组和空白对照组不给予AGS诱发;以高效液相色谱方法检测脑中氨基酸水平的变化,以免疫组织化学方法观察各组动物脑皮质及海马内GAD的表达;分别以邻苯三酚自氧化法、硫代巴比妥法、硝酸还原酶法检测各组小鼠脑内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)的水平,以Golgi染色方法观察各组小鼠脑内树突棘形态变化,初步探讨柴胡桂枝汤挥发油改善KO小鼠AGS的可能机制。结果KO小鼠脑皮质及海马内GAD阳性神经元数量与WT小鼠相比明显减少(P<0.05)。KO溶媒对照组和KO空白对照组(未经AGS诱发)小鼠与WT溶媒对照组和和WT空白对照组相比,脑内Y-氨基丁酸及甘氨酸水平明显降低,谷氨酸水平明显升高(P<0.05);KO溶媒对照组与KO空白对照组相比,脑内Y-氨基丁酸、甘氨酸,谷氨酸水平无明显变化;KO溶媒AGS组小鼠经AGS诱发后,与KO溶媒对照组和KO空白对照组相比,脑内γ-氨基丁酸水平有明显降低(P<0.05);KO小鼠药物处理组与KO溶媒AGS组及WT用药组相比,脑内谷氨酸水平均有明显降低(P<0.05)。与WT溶媒AGS对照小鼠相比,KO溶媒AGS组小鼠脑内SOD活力明显降低,MDA和NO水平则明显增高(P<0.05);‘KO溶媒对照组与KO空白对照组脑内SOD、MDA和NO水平无明显变化,KO小鼠用药组注射柴胡桂枝汤挥发油后,与KO溶媒AGS组和WT用药照小鼠相比,SOD活力增高,而MDA和NO水平均降低(P<0.05)。各组KO小鼠与各组WT小鼠脑皮质树突棘形态改变无统计学差异(P>0.05)。结论柴胡桂枝汤挥发油可能通过降低兴奋性氨基酸水平,增加抑制性氨基酸水平,增强自由基清除,阻止过氧化物生成,减少NO神经毒性来治疗Fmr1基因敲除小鼠听源性惊厥。