目的:通过检测p53、p21在阿霉素肾病小鼠中的表达,探讨细胞衰老机制是否参与阿霉素肾病的发生和发展及其可能的机制。方法:将60只6周龄、雄性BALB/c小鼠随机分为两组:正常组和阿霉素肾病模型组(模型组),每组30只。小鼠适应性饲养1周后,模型组尾静脉一次性注射阿霉素10mg/kg,正常组尾静脉一次性注射等量生理盐水。模型组于给药7天后留取24h尿蛋白进行定量,24h尿蛋白定量≥50mg/kg者纳入本实验。两组分别于给药后第0、2、4、6周末随机选取6只小鼠处死,并留取24小时尿液、血清及肾脏组织。检测24小时尿蛋白定量及血生化指标。肾组织石蜡切片行HE和PAS染色,观察各组肾小球硬化程度和肾小管损伤程度。免疫组织化学法检测各组肾脏p53蛋白、p21蛋白的表达水平。Real-time PCR技术检测肾脏p53、p21的mRNA表达。分析p53、p21蛋白及p53、p21mRNA表达与其它指标的相关性。结果:1阿霉素肾病模型组和对照组各期24h尿蛋白定量的变化对照组0、2、4、6周末尿蛋白比较差异均无统计学意义(P>0.05)。模型组尿蛋白在2周末[(16.19±1.13)g/24h]、4周末[(14.50±1.46)g/24h]、6周末[(12.52±1.2)g/24h]显著高于同时期对照组[(2.02±0.47)g/24h]、[(2.25±0.55)g/24h]、[(2.09±0.56)g/24h],差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组尿蛋白从2周末显著增高,且2周末达高峰,4、6周末与2周末相比,尿蛋白稍有下降(见表2)。2阿霉素肾病模型组和对照组各期血清生化指标的变化对照组0、2、4、6周末血白蛋白、总胆固醇比较差异均无统计学意义(P>0.05)。模型组血白蛋白在2周末[(19.63±1.28)g/L]、4周末[(23.09±1.91)g/L]、6周末[(26.51±1.34)g/L]明显低于同时期对照组[(36.77±1.81)g/L]、[(37.04±1.79)g/L]、[(36.74±1.49)g/L],差异均有统计学意义(P<0.05),模型组血白蛋白从2周末明显降低,且2周末达最低值,4、6周末与2周末相比,血白蛋白稍增高。模型组胆固醇在2周末[(7.56±1.10)mmol/l]、4周末[(9.07±1.02)mmol/l]、6周末[(7.18±0.62)mmol/l]明显低于同时期对照组[(2.17±0.15)mmol/l]、[(2.16±0.24)mmol/l]、[(2.25±0.25)mmol/l],差异均有统计学意义(p<0.05),模型组总胆固醇从2周末显著增高,且4周末达峰值,6周末与4周末相比,总胆固醇稍降低。两组0、2、4、6周末血肌酐水平比较差异无统计学意义(p>0.05,见表3)。3阿霉素肾病模型组和对照组各期肾组织病理学改变光镜下,对照组0、2、4、6周末及模型组0周末肾小球及肾小管形态结构正常。模型组2周末肾小球可见少量球囊粘连,肾小管出现蛋白管型,肾间质可见炎性细胞浸润;4周末可见系膜细胞轻中度增生,部分肾小球硬化,肾小管节段性扩张,肾间质较多炎性细胞浸润;6周末出现系膜细胞中重度增生,肾小球局灶节段性硬化,肾小管萎缩,肾间质大量炎性细胞浸润。对照组0、2、4、6周末肾小球硬化及肾小管间质损伤比较差异均无统计学意义(p>0.05)。模型组肾小球硬化及肾小管间质损伤程度在2周末(0.535±0.116,1.133±0.136)、4周末(0.738±0.112,1.417±0.172)、6周末(0.908±0.113,1.633±0.136)显著高于同时期对照组(0.020±0.020,0.067±0.061)、(0.022±0.017,0.083±0.075)、6周末(0.018±0.015,0.067±0.052),差异均有统计学意义(p<0.05),随时间病变程度逐渐加重(见图1)。4阿霉素肾病模型组和对照组各期肾组织p53、p21蛋白表达水平的变化对照组0、2、4、6周末p53、p21蛋白表达水平比较差异均无统计学意义(p>0.05)。模型组p53、p21蛋白表达水平在2周末(51.944±15.081,59.674±15.234)、4周末(164.902±12.852,202.428±24.098)、6周末(254.673±24.703,348.115±25.180)显著高于同时期对照组(8.111±1.744,11.883±1.863)、(7.869±1.940,12.652±2.174)、(8.537±1.262,12.422±2.848),差异均有统计学意义(p<0.05),随时间p53、p21蛋白表达逐渐增多(见图2、表4)。5阿霉素肾病模型组和对照组各期肾组织p53、p21mRNA表达水平的变化对照组0、2、4、6周末p53、p21mRNA表达水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。模型组p53、p21mRNA表达水平在2周末(4.52±0.44,6.99±0.80)、4周末(6.43±0.68,9.36±0.69)、6周末(8.55±0.84,11.96±0.79)显著高于同时期对照组(0.96±0.10,1.04±0.09)、(0.97±0.08,1.04±0.08)、(0.97±0.11,1.05±0.08),差异均有统计学意义(P<0.05),随时间p53、p21mRNA表达水平逐渐增高(见表5)。6阿霉素肾病模型肾组织p53、p21的表达与不同指标的相关性模型组中,p53蛋白表达与肾小球硬化、肾小管间质损伤、尿蛋白及总胆固醇呈正相关(r=0.877,r=0.830,r=0.456,r=0.576,P<0.05),与白蛋白呈负相关(r=-0.343,P<0.05),与血肌酐不相关(P>0.05);p53mRNA表达与肾小球硬化、肾小管间质损伤、尿蛋白及总胆固醇正相关(r=0.940,r=0.926,r=0.473,r=0.524,P<0.05),与白蛋白呈负相关(r=-0.379,P<0.05),与血肌酐不相关(P>0.05);p21蛋白表达与肾小球硬化、肾小管间质损伤、尿蛋白及总胆固醇呈正相关(r=0.838,r=0.804,r=0.410,r=0.525,P<0.05),与白蛋白呈负相关(r=-0.396,P<0.05),与血肌酐不相关(P>0.05);p21mRNA表达与肾小球硬化、肾小管间质损伤、尿蛋白及总胆固醇呈正相关(r=0.948,r=0.940,r=0.520,r=0.559,P<0.05),与白蛋白呈负相关(r=-0.377,P<0.05),与血肌酐不相关(P>0.05)(见表6)。结论:阿霉素肾病小鼠模型可以模拟人类微小病变型肾病及局灶节段性肾小球硬化症,表现为大量蛋白尿、低白蛋白血症、高胆固醇血症。衰老基因p53、p21在阿霉素肾病小鼠模型2周末即表达增加,且与阿霉素肾病病变程度相关,提示细胞衰老存在于阿霉素肾脏病早期,参与阿霉素肾病的发生和发展。