一株广藿香内生真菌和一株虫生真菌的次级代谢产物及其生物活性研究

来源 :桂林理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:steve0309
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植物内生真菌具有丰富的物种多样性,能产生与宿主相同或相似的活性代谢产物等生物学特性,广藿香作为广东道地药材,用途广泛,具有重要的药用和经济价值,然而目前鲜有对广藿香内生真菌及其代谢产物的报道。因此充分发掘广藿香内生真菌种类和活性代谢产物,具有重要的理论和现实意义。本论文采用MCI柱层析、Sephadex LH-20凝胶柱层析,反相硅胶柱层析,高效液相反相制备柱色谱等方法,从广藿香内生真菌光轮层碳壳菌(Daldinia eschscholzii)A630中分离得到7个化合物,通过1H-NMR、13C-NMR、ESI-MS等波谱技术,分别鉴定了6个化合物,Dihydrosphaerolone(M01)、8-甲氧基-1-萘酚(M02)、1-(2,6-dihydroxyphenyl)-butan-1-one(M03)、helicascolide A(M04)、6-hydroxymellein(M05)、4,8-二羟基-1-四氢萘酮(M06),其中化合物3为首次从该属真菌中分离得到。采用SRB法,测定化合物(M01-07)对SF-268(神经胶质细胞)、MCF-7(乳腺癌细胞)、NCI-H460(非小细胞肺癌细胞)、HepG-2(肝癌细胞)的细胞毒活性,结果表明化合物M01、M03、M07对上述肿瘤细胞均具有很好的细胞毒活性,在100 ug/mL浓度下,其抑制率在72.68%-98.56%之间。化合物M02对SF-268、MCF-7、NCI-H460具有良好的细胞毒活性。生物农药因具有低残留、选择性强、人畜危害小和不易产生抗药性等特点成为人们关注的热点,其中最具代表性的是白僵菌、绿僵菌等虫生真菌。深红虫草(Cordyceps cardinalis)是一种寄生于鳞翅目幼虫的病原真菌,前期研究发现其无性型菌株C033能产生卵孢菌素(Oosporein),而卵孢菌素是生防真菌布氏白僵菌的主要代谢产物。本论文首先对卵孢菌素制剂进行了初步探索,并研究了卵孢菌素对常见农业害虫斜纹夜蛾(Spodoptera litura)、甜菜夜蛾(S.exigua)的拒食活性、对小菜蛾(Plutella xylostella)的杀虫活性,进一步研究了菌株C033高产卵孢菌素的最佳发酵条件。经初步研究发现,卵孢菌素制剂困难,难溶于常见的农用乳化剂。生物活性测试结果表明,在处理24 h后,卵孢菌素对斜纹夜蛾的选择性和非选择性拒食中浓度分别为2907.17 ppm、1419.38 ppm,对甜菜夜蛾的选择性和非选择性拒食中浓度分别为1541.35 ppm、2055.63 ppm,对小菜蛾的毒性不明显,其致死中浓度LC50为2569.85 ppm(48 h)。通过单因素及正交试验,发现在8种常见的培养基中,产卵孢菌素最适培养基为PPD,最优培养条件为培养时间为6 d,接种量为6%,初始pH为7,培养温度为24℃,装液量为100 mL(500 mL锥形瓶),摇瓶转速120 r/min。最优条件下菌株C033发酵液中卵孢菌素含量达到448.70μg/mL。
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