【摘 要】
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干扰素与宿主的抗病毒防御反应、细胞生长和免疫调节密切相关。干扰素的合成与功能受干扰素调节因子(interferon regulator factors,IRFs)的调节,其中IRF-7是IRFs超家族中的重
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干扰素与宿主的抗病毒防御反应、细胞生长和免疫调节密切相关。干扰素的合成与功能受干扰素调节因子(interferon regulator factors,IRFs)的调节,其中IRF-7是IRFs超家族中的重要一员,是诱导产生I型干扰素的关键性调节因子。病毒感染细胞后,IRF-7将被磷酸化并进入细胞核,启动下游靶基因的转录,发挥抗病毒效应。IRF-7还可直接作用于病毒启动子,抑制病毒的激活。
IRF-7的稳定性和活性受蛋白质翻译后修饰调节。研究发现,IRF-7可以被泛素化和乙酰化修饰,而这些修饰通常发生在靶蛋白的赖氨酸位点上,我们推测赖氨酸突变将对IRF-7的稳定性和活性产生重要的影响。我们用定点突变的方法将IRF-7中不同位置上的赖氨酸残基分别突变为精氨酸,并将野生型和突变型IRF-7表达质粒分别转进人胚肾细胞系293T中,检测突变对IRF-7稳定性和活性的影响。发现与野生型相比突变体K179R、K296R、K444R、K446R、K452R稳定性提高,而突变体K209R的稳定性降低,突变体K45R和K341R与野生型相比稳定性没有明显变化。
赖氨酸突变影响IRF-7的抗病毒活性。IRF-7可以抑制人8型疱疹病毒(HHV-8)激活蛋白RTA对ORF57(HHV-8第57个开放读码框)的激活。将野生型或突变型IRF-7表达质粒、RTA表达质粒和ORF57启动子控制的报道质粒共转染293T。细胞,检测报道基因的表达水平。发现与野生型IRF-7相比,IRF-7K452R.对RTA激活的抑制作用增强,K45R、K209R、K341R、K444R和K446R.对RTA的抑制作用减弱,K179R和K296R的抑制能力与野生型相比没有明显差异。
赖氨酸突变影响IRF-7激活干扰素基因表达的能力。将野生型和突变型IRF-7与干扰素启动子控制的报道质粒共同转染293T细胞并比较激活效果。与野生型IRF-7相比,IRF-7 K209R激活干扰素启动子的能力增强,K179R、K296R、K341R、K444R、K446R、K452R激活干扰素启动子的能力下降,K45R几乎丧失激活干扰素基因启动子的能力。
本文提出并证实赖氨酸参与调节IRF-7的稳定性和活性,为进一步分析与赖氨酸有关的蛋白质修饰对IRF-7的影响提供了线索。
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