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农用益生菌制剂在改善动物体内微生态平衡、预防疾病、促进生长及净化养殖环境等方面发挥着重要作用。目前,各益生菌制剂多采用成分复杂、价格昂贵的专用培养基培养。本研究以鲜果渣为主原料,用酵母菌、乳酸菌、枯草杆菌和曲霉菌益生菌群为出发菌种,再复配以其他物质,采用有益微生物发酵果渣,以期培养出高浓度的益生菌菌体,同时提高果渣蛋白含量,最终获得具有饲料添加剂和禽畜用益生菌制剂双重功能的产品。该方法成本低廉、工艺简单、设备要求低。通过试验,得出以下结论:LAB单独发酵结果:在相同添加量的尿素、红糖、乳清粉和蔗糖的苹果渣培养基培养LAB,发现LAB在添加尿素和乳清粉时生长较好,在红糖和蔗糖中略差。再在尿素和乳清粉的不同添加量分别培养LA、LB和ST,每24h测其菌数和pH值,结果显示:LA在添加1%尿素和1.5%乳清粉时生长最好,活菌数最大为3.81×10~8个/mL,pH为3.75;LB在添加尿素1.5%,乳清粉2.5%时菌体形态良好,活菌数最高为1.41×10~8个/mL,pH为4.40;ST在添加2%尿素和2.5%乳清粉时生长最好,球菌形成的链较长,活菌数最大为3.88×10~8个/mL,pH为5.23。不同乳酸菌混合发酵结果:采取前期试验配方苹果渣:蒸馏水=1:10,尿素2%,乳清粉2.5%。将LA、LB、ST按菌种比例1:1:1、1:1:2、1:2:1、1:2:2、2:2:1,接种总量5%,分别在37℃、39℃、41℃下培养,每24h测菌数和pH值。结果表明:在37℃,1:1:2菌数最大,为3.60×10~8个/mL, pH为4.03,镜检杆菌明显占优势;在39℃,1:2:1,最大菌浓为4.01×10~8个/mL,pH变化趋势一致,球杆菌分布较好;在41℃,1:1:2时菌数最大,为4.45×10~8个/mL,pH变化趋势相近,镜检结果与39℃相近。再对上述较好的三组合进行比较试验,以活菌数为评价标准。结果显示:活菌数无明显差异,但39℃,1:2:1时杆菌数与球菌数分布较均匀。酵母菌发酵:以添加相同浓度的尿素、红糖、乳清粉和蔗糖的果渣做为苹果渣培养基,28℃培养酵母。显示:酵母菌在添加尿素和蔗糖培养基中生长较好,乳清粉中次之,红糖略差。再在不同尿素添加量下培养,每24h测其菌数和pH值,结果显示:在2%尿素菌体生长最好,发酵液上层有明显的乳白色物聚集,发酵味馥郁,且菌体形态较好,活菌数最大值为5.62×10~8个/mL,pH为5.61。为给后期和乳酸菌混合发酵提供温度参数,再用该培养基不同温度培养酵母,测定活菌数。结果显示:30～36℃,菌数增长明显,都可迅速达108个/mL,在30℃,活菌数最高为7.47×10~8个/mL。酵母菌和乳酸菌混合发酵:将LA、LB、ST和Y四菌接入灭菌培养基,接种总量6%,接种比例为1:1:1:1、1:1:1:2、1:1:1:3、1:1:1:4、1:1:1:5和1:1:1:6,在不同温度(33℃、35℃、37℃、39℃)培养,每24h测其活菌数和pH值,结果显示:在33～39℃,经一定时间,各温度不同比例的活菌数都可达108个/mL,在35℃,1:1:1:6的活菌数最高,达1.99×10~8个/mL;37℃,1:1:1:3的活菌数最大为2.43×10~8个/mL;在39℃下,1:1:1:2时活菌数最高,为1.48×10~8个/mL。发酵结束,pH在3.80左右。镜检发现酵母菌生长较少,乳酸菌明显占优势。综合前期结果及Box-Benhnken试验原理,采用响应面分析法对工艺进行优化。结果显示:发酵温度36℃、菌种比例1:1:1:4、培养100h.活菌数和菌落分布都较好,定为最佳条件。验证试验:无论是干渣还是鲜渣,在最佳条件下进行验证,活菌数彼此极为相近,酵母菌菌数最大为1.15×10~8个/mL,乳酸菌为1.21×10~8个/mL。其他益生菌发酵:直接采用前期确定的培养基,5%接种量,分别在28℃和37℃培养曲霉和枯草芽孢杆菌。结果显示:枯草芽孢杆菌在其上生长良好,活菌数最高可达4.73×10~8个/mL;曲霉不仅可以在该培养基上进行繁殖,而且生长时间同在最适培养基中生长的周期(7d)相近,说明用该培养基培养枯草芽孢杆菌和曲霉菌可行。菌剂制备及指标测定:采用前期试验各最佳条件培养,试制菌剂,并测定各指标。结果:粗蛋白平均含量为28.31%,真蛋白为17.42%,还原糖为6.7%;活菌数为6.85×10~8个/mL;28℃保存6d降至3.57×10~7个/mL、37℃保存6d降至2.39×10~7个/mL。