论文部分内容阅读
目的:1.利用BOP [N-亚硝基双(2-氧丙基)胺]创建金黄地鼠肝内胆管癌(ICC)模型。2.研究Wisp-1蛋白、β-catenin蛋白、TGF-β1蛋白及Smad4蛋白在ICC中的表达情况及与肿瘤发生的关系。方法:1.采用30只8–9周龄雌性金黄地鼠(实验组27只,对照组3只),实验组动物皮下注射大剂量BOP共5次(每周1次,首次剂量为70mg/kg体重,以后每次20mg/kg),对照组注射等剂量生理盐水。首次用药后17-54天实验组12只动物死去,期间4只动物逃逸,同时处死一只对照组动物,取其肝脏组织制作石蜡切片做组织病理学观察;54天处死余下存活的13只动物(包括11只实验组动物与2只对照组动物),取肝脏组织部分做石蜡切片,部分-80°C冰箱保存。2.汇总57例蜡块(吴泽珊用大剂量BOP诱导出金黄地鼠ICC实验中所获的肝组织蜡块31例,本次试验所获的肝组织蜡块26例),用免疫组织化学方法检测其中Wisp-1、β-catenin、TGF-β1及Smad4蛋白的表达情况,同时选取40例人ICC蜡块做免疫组化以作比较,再用蛋白质印迹法检测13例新鲜组织中TGF-β1及Smad4蛋白的表达情况。结果:1.实验组大部分动物(14/23)发生了ICC,部分动物(7/23)发生了胆管不典型增生,1例发生了灶性胆管增生,1例无胆管增生。2.Wisp-1、β-catenin、Smad4蛋白在金黄地鼠ICC组织、胆管不典型增生组织中的阳性表达均高于正常组织(P<0.01),胆管不典型增生组织中的阳性表达有高于ICC组织的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05); TGF-β1蛋白在金黄地鼠ICC组织中的阳性表达高于正常组织(P<0.01),胆管不典型增生组织中的阳性表达有高于正常组织的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05),胆管不典型增生组织中的阳性表达低于ICC组织(P<0.05)。Wisp-1蛋白在人ICC组织中的阳性率高于金黄地鼠ICC组织(P<0.05);β-catenin、TGF-β1蛋白在人ICC组织中的阳性率有高于金黄地鼠ICC组织的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05);Smad4蛋白在人ICC组织中的阳性率有低于金黄地鼠ICC组织的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。蛋白质印迹法的结果显示TGF-β1蛋白在金黄地鼠ICC组织中的表达低于胆管不典型增生组织及正常组织(P<0.05),在胆管不典型增生中的表达有低于正常组织的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。而Smad4蛋白在金黄地鼠ICC组织中的表达高于胆管不典型增生组织及正常组织(P<0.05),在胆管不典型增生中的表达有高于正常组织的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1.大剂量BOP可以诱导金黄地鼠ICC,这为研究ICC提供了可靠的动物模型,具有成模周期短、可重复性高等优点。2.免疫组化实验证实了无论人肝内胆管癌还是BOP诱导金黄地鼠肝内胆管癌,β-catenin与Wisp-1均呈高表达,尤其是在胆管不典型增生的阶段,两者的表达甚至有高于胆管癌的趋势,这说明在胆管癌的发生初期,β-catenin与Wisp-1就发挥了重要作用,与肝内胆管癌发生的分子病理学基础密切相关。3.免疫组化显示TGF-β1蛋白在金黄地鼠ICC组织中的表达较正常组织高,在人ICC组织中的表达也有较高表达,但在胆管不典型增生组织中的表达很低,而蛋白质印迹法的结果显示TGF-β1蛋白在金黄地鼠ICC组织中的表达却是低于正常组织及胆管不典型增生组织的,提示TGF-β1蛋白在ICC中的作用有待深入研究。4.免疫组化显示Smad4蛋白在金黄地鼠ICC组织及胆管不典型增生组织中的表达都高于正常组织,在人ICC组织中也高表达,提示Smad4蛋白与ICC的发生发展有关,蛋白质印迹法的结果显示Smad4蛋白在金黄地鼠ICC组织及胆管不典型增生组织中的表达也高于正常组织,提示Smad4在ICC的发生发展过程中有重要的作用。