猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是一种重要的人畜共患病病原菌,能引起猪的败血症、脑膜炎、肺炎、多发性关节炎和多发性浆膜炎等；该菌在特定情况下也能感染人,引起人的急性败血症、脑膜炎、心内膜炎等疾病。猪链球菌病呈世界性分布。目前,美国、荷兰、英国、加拿大、澳大利亚、新西兰、比利时、巴西、丹麦、挪威、芬兰、西班牙、德国、爱尔兰、中国、日本等几乎所有养猪国家和地区均有发生猪链球菌病的报道,这不仅给养猪业造成了巨大的经济损失,同时还对公共卫生尤其是相关从业人员的健康构成严重威胁。在中国,SS2最早于90年代初发生于广东,但未见感染人的报道；1998～1999年江苏省部分地区猪群爆发该病,同时造成25人感染发病,其中14人死亡；尤其是2005年夏季在四川猪群爆发该病,造成214人感染发病,其中39人死亡.此外,重庆、香港、江西、广东等地也有人感染猪链球菌的零星病例发生。因此,加强猪链球菌检测技术的研究,开展猪链球菌的检测,防止猪链球菌2型传入传出,为进出口贸易提供技术保障,具有重要的意义。1.猪源动物产品中猪链球菌2型检测方法的建立建立了猪源动物产品中猪链球菌2型的选择性增菌和选择性平板分离方法。样品与Todd-Hewitt肉汤(THB)按1：10的比例均质后,加入终浓度分别为0.2g/L叠氮钠、0.0002g/L结晶紫和0.1g/L亚硫酸钠,于37℃静置培养18h后,在含有0.2g/L叠氮钠、0.0002g/L结晶紫和0.1g/L亚硫酸钠的5%脱纤维羊血哥伦比亚琼脂的选择性平板上进行平板分离。与非选择性增菌液和分离平板相比,猪链球菌典型菌落显著增加,杂菌显著减少,分离更加容易,分离率显著提高。2.猪链球菌2型分型血清的制备将猪链球菌2型(SS2)参考菌株ATCC43765在Todd-Hewitt肉汤中连续传代三代,每次培养6小时,然后按照1：10的比例接种于Todd-Hewitt肉汤仅培养2小时,经灭活处理后获得含较多荚膜物质的全菌菌体抗原。该抗原按照每周三次,除第一周按2.0x109cfu/次,其余按8.0x109cfu/次静脉免疫家兔制备全菌抗血清。经测定,该血清仅与SS2发生凝集反应,凝集价为128,不与其它链球菌发生凝集反应,表明该血清具有较高的特异性,可作为SS2的分型血清。在全国检验检疫系统广泛应用,仅在江苏口岸对125株疑似菌株进行鉴定,共鉴定出17株猪链球菌2型菌株。3.猪链球菌2型溶血素基因的检测根据GenBank发表的猪链球菌2型(SS2)溶血素基因(sly)全序列,利用oligo(7.0)软件设计和合成了可扩增长度为495bp的引物,建立了的SS2溶血素基因的PCR检测方法。应用该方法可从SS2参考菌株ATCC43765、SS2江苏分离株HA9801中扩增出495bp的条带,利用Hind Ⅲ限制性内切酶对具有相应单一酶切位点的PCR扩增产物就进行酶切,获得预期的314bp和181bp的2个DNA片段,检测灵敏度达到2.5×102cfu/mL;但不能从马链球菌兽疫亚种ATCC35246、大肠埃希菌ATCC25922、金黄色葡萄球菌ATCC25923.单增李斯特杆菌ATCC19115/413、粪肠球菌ATCC29212中扩增出相应条带。PCR扩增产物的测序结果与GenBank的猪链球菌sly基因(Z36907)核苷酸序列完全一致。表明本方法可快速、敏感、特异地检测SS2的溶血素基因。对江苏口岸分离的125株疑似猪链球菌菌株进行溶血素基因检测,其中27株猪链球菌均检出了猪链球菌溶血素基因,阳性率为100%,其它菌株均未检出猪链球菌溶血素基因。4.江苏出入境猪源动物产品中猪链球菌的检测2005年～2010年,对江苏出入境猪源动物产品中进行了猪链球菌检测,通过选择性增菌和平板分离,从920份样品中分离到125链球菌菌株。通过生化鉴定、血清学鉴定和分子鉴定,共检出27株猪链球菌,阳性率为2.93%(27/920),其中猪链球菌2型为17株,阳性率为1.85%(17/920)。结果表明,江苏出口养殖场及进出境猪副产品中有猪链球菌存在,但流行率不很高。上述工作为江苏地区猪源动物产品的国际贸易提供了技术支撑,为猪链球菌病防治提供了可靠的科学依据。相关研究内容已经纳入质检总局制定的重大动物疫情防控猪链球菌2型实施方案和猪链球菌2型检测的系列国家标准。