appA植酸酶基因与纳豆激酶基因的克隆与表达研究

来源 :中国农业科学院蚕业研究所 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zht336
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该实验从猪粪中筛选出一个高产植酸酶的E.coli菌株,根据Dassa等报道的序列设计一对引物通过PCR方法扩增了appA基因.由appA植酸酶在家蚕生物反应器中的超量表达以及appA植酸酶本身所具有的酶学特性推断,家蚕表达的appA植酸酶适合于作为新一代植酸酶添加剂应用于饲料工业与畜禽养殖业中.纳豆激酶是一种能够在体内及体外直接分解交联纤维蛋白的新型溶血栓酶.该实验以B.subtilis(natto)基因组DNA为模板扩增了nk基因,测序结果显示与Nakamura报道的纳豆激酶基因高度同源,其氨基酸序列也含有丝氨酸蛋白酶的活性保守中心(serine221,histidine64,aspartic acid32).将nk基因克隆至转移载体pVL-1393中后用常规方法获得重组病毒,感染家蚕后纳豆激酶获得正确表达.由于纳豆激酶是一种蛋白酶,我们首先检测并发现表达产物具有蛋白酶活性,通过纤维白平板检测表达产物具有溶圈活性,表明表达的纳豆酶具有溶解血栓的生物学功能.
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