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转氨酶ATA117在合成手性胺类药物西他列汀中具有重要用途,本论文构建了不同的表达体系,优化表达条件,以实现ATAT117的高效表达,并对重组转氨酶的发酵工艺和产品西他列汀的制备工艺进行研究。我们首先以E.coli BL21(DE3)作为宿主,构建了PBV220-ATA117, pCDFDuet-ATA117, pETDuet-ATA117和pRSFDuet-ATA117四种重组载体,从蛋白表达水平和催化活力上进行了考察,选出表达能力较高的载体pETDuet-ATA117,其活力为137U/L,比活为0.24U/mg粗蛋白。对重组转氨酶的酶学性质进行了表征,其最适pH为9.0,在pH7.0-10.0的范围内都表现出很高的稳定性,该酶同时也具有很好的热稳定性,在反应温度45℃时,酶活力半衰期达到47.8h,在常温下,半衰期超过100h。为了提高Eco(pETDuet-ATA117)的发酵酶活,我们先使用单因素法和响应面法结合的方式对培养基成分进行了优化,得到最佳培养基配方:甘油14.45g/L,酵母粉7.27g/L,胰蛋白胨5.72g/L, NaC110g/L, K2HP044g/L。在优化培养基的基础上又对诱导条件进行了研究,最适诱导条件下酶活为713.7U/L。随后进行了lOL发酵罐中的分批和补料发酵工艺研究,最终菌体密度达到29.78g/L,酶活力达到3971U/L,比LB培养基发酵提高了30多倍。通过制备工艺的优化,50g/L底物浓度时,最佳的助溶剂为40%的DMSO,最佳的底物:细胞:辅酶比例为50:12.5:0.37,在此比例下,采用全细胞催化,8h可将底物完全转化为西他列汀,ee>99.95%。随后对产物西他列汀的分离纯化工艺进行了初步探索,最终收率达到80%。