NIRF对HBV复制的影响及其对组蛋白H3乙酰化水平的修饰

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目的为研究NIRF(Np95/ICBP-90like RING finger protein)对乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)的复制以及NIRF对与HBV cccDNA(乙型肝炎病毒共价环状闭合DNA)结合的组蛋白H3乙酰化水平的影响。方法采用脂质体转染将pGEM-HBV1.3和pFLAG、pGEM-HBV1.3和pFLAG-NIRF、pGEM-HBV1.3质粒分别转入HepG2细胞,建立NIRF表达的HepG2细胞模型,转然后3d提取蛋白用Western-blot并检测其表达情况,在转染后12h、24h、48h、72h收集细胞上清液,然后用ELISA结合RT-PCR检测HBsAg、HBeAg分泌量以及HBVcccDNA的量,并同时说明HBV在HepG2细胞内是完成完整复制表达的,最后与ELISA一样在相同的时间点采用染色质免疫共沉淀(ChIp)的方法监测与HBV cccDNA结合的组蛋白H3以及H3乙酰化水平的动态变化。结果结果显示在实验组和对照组中HBeAg、HBsAg的分泌量以及HBV cccDNA的表达量都在48h达到峰值,对照组NIRF蛋白表达的实验组HBV标志物HBeAg、HBsAg的分泌量以及HBV cccDNA的表达量均有下调,表明NIRF对HBV复制有明显的抑制作用。组蛋白H3及乙酰化的组蛋白H3都与HBV cccDNA的动态变化水平呈现相似的平行关系,而NIRF蛋白也抑制了组蛋白H3的表达水平和乙酰化水平。结论结论证实NIRF在体外能抑制HBV在肝癌细胞中的复制,而且这一抑制结果还可能参与HBV病毒在宿主细胞内的组装、蛋白质降解和病毒对外分泌等现象。而且NIRF能下调与HBV cccDNA结合的组蛋白H3和乙酰化组蛋白H3的表达。期待在表观遗传学研究水平上,这为进一步深入研究HBV在宿主细胞中的感染机制,阐明NIRF的功能及其对乙型肝炎病毒的复制能力及其对乙肝相关抗原表达情况的影响具有重要的科学意义。期待在表观遗传学水平上,找到一个抑制HBV感染致病的临床新思路。
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