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目的:以兔脂肪源性成骨细胞为种子细胞,适时与人部分脱钙骨基质体外构建组织工程骨,探讨兔脂肪源性成细胞与人部分脱钙骨基质体外构建组织工程骨的可行性。方法:在无菌条件下取新西兰大白兔双侧腹股沟及腋窝皮下脂肪组织,进行兔脂肪源性干细胞分离、培养、成骨诱导和成脂诱导。对培养的原代及传代细胞进行CD44免疫荧光染色,通过倒置相差显微镜和透射电镜分别对原代及传代培养细胞、成骨诱导细胞和成脂诱导细胞的生长情况、细胞形态及细胞的内部显微结构进行观察。对成骨诱导后细胞分泌的碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原、钙结节、骨桥蛋白和细胞周期进行检测,对成脂诱导后细胞进行油红O染色。适时将功能状态良好的兔脂肪源性成骨细胞以一定的浓度与人部分脱钙骨基质支架材料复合构建组织工程骨,并于复合后24h、48h和72h后用扫描电镜观察细胞在支架材料孔隙内贴附、生长和增殖情况。结果:原代细胞体外培养24～48h可见细胞贴壁、数量稀少,呈不规则多角形,散在分布,培养1W细胞数量增多,呈集落分布,细胞形态呈长梭形,培养2W细胞数量明显增多,呈旋涡状排列。原代及传代细胞CD44免疫荧光染色阳性。兔脂肪源性干细胞在加入诱导剂1W后,其形态逐渐由长梭形变为短梭形,2W后变为多角形或鳞片形,其胞体、细胞核和核浆比例逐渐增大,诱导的细胞突起内可见丰富的粗面内质网,在诱导2W后,细胞开始分泌碱性磷酸酶和骨桥蛋白,3W后有钙结节形成;在诱导2W后细胞具有良好的增殖能力,诱导2W和3W的细胞增殖能力明显高于诱导1W的细胞,差异显著,而诱导2W和3W的细胞增殖能力无明显差异;兔脂肪源性成骨细胞与人部分脱钙骨基质复合后24h,细胞在材料孔隙内部分贴附良好,部分堆积成团;48h基本全部贴壁;72h全部贴壁,细胞完全伸展,相邻细胞间有突起相互连接,细胞分布均匀,数量增多。成脂诱导后细胞油红O染色阳性证实脂肪源性干细胞转化为脂肪细胞。结论:用兔脂肪组织分离、培养的细胞为脂肪源性干细胞;兔脂肪源性干细胞经2W时间诱导已成功转化为功能活跃的脂肪源性成骨细胞,是与支架材料复合构建组织工程骨比较适宜的时机;兔脂肪源性成骨细胞与人部分脱钙骨基质生物相容性良好,支架材料为细胞生长提供了良好的三维空间,用兔脂肪源性成骨细胞与人部分脱钙骨基质构建组织工程骨是可行的。