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【背景】 肺癌是全球范围内发病率及死亡率极高的恶性肿瘤之一，其中约80％为非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC），在我国，约70%-80%的患者在确诊时已为中晚期，失去了手术机会。因此，化学药物治疗成为中晚期NSCLC患者治疗的主要手段。尽管新研发的药物层出不穷，患者的5年生存率仅为10%-15%，最重要的一个原因就是肺癌细胞对化疗药物产生了多药耐药（multidrug resistance，MDR）。研究表明，非小细胞肺癌的多药耐药是一个多通道参与、多因素影响及多种蛋白介导的复杂过程。近年来，随着基因组学及蛋白组学研究手段的不断发展，越来越多的肺癌耐药分子被发现，然而，肺癌MDR的分子机制尚未完全阐明。 MicroRNA(miRNA)是近年来新发现的一类广泛存在于动植物体内的内源性非编码的单链小分子RNA,长度为19-25nt。miRNA主要通过在转录后水平与特异的靶mRNA的3＇UTRs（untranslated regions）结合使之降解或者抑制其翻译,从而调控相关靶基因的表达。目前已经鉴定的人类基因组中的miRNA数目已超过1000个。随着对miRNA功能研究的深入,越来越多的研究成果发现，miRNA可能在调控细胞增殖、分化、凋亡等方面起重要作用，并且在人类肿瘤形成及调节肿瘤耐药性方面也扮演者重要角色。因此，我们推测：miRNA可能参与某些耐药基因及蛋白表达的调控，进而影响肿瘤细胞对化疗药物的敏感性。目前为止，mir-17-92基因簇在NSCLC多药耐药中的作用及机制尚未见报道。 【目的】 探讨miR-17-92家族成员miR-17/miR-20a/miR-20b/miR-92b/miR-106a在非小细胞肺癌MDR中的调节作用及分子机制，进而更全面地阐明肺癌耐药机制，为逆转肿瘤细胞耐药提供理论依据。 【方法】 1.利用Real time RT-PCR对miR-17/miR-20a/miR-20b/miR-92b/miR-106a的芯片结果进行验证； 2.通过细胞转染，用miR-17/miR-20a/miR-20b/miR-92b/miR-106a的寡核苷酸模拟物分别上调A549/DDP中miR-17/miR-20a/miR-20b/miR-92b/miR-106a的表达，miR-17/miR-20a/miR-20b/miR-92b/miR–106a特异的反义寡核苷酸抑制物分别下调 A549细胞的mir-17/miR-20a/miR-20b/miR-92b/miR-106a的表达；并检测其转染效率。 3.通过CCK8实验分别检测miR-17/miR-20a/miR-20b/miR-92b/miR-106a对肺癌细胞耐药株A549/DDP及非耐药株A549体外药物敏感性的影响，同时筛选出能影响药物敏感性的microRNA。 4.通过CCK8实验分别检测 miR-92b对化疗药物DDP、VP-16、VCR、ADM及5-FU的多药耐药效应。 5.通过生物信息学网站或软件预测miR-92b调控的靶基因。 6.利用RT-PCR、Western blot、双荧光素酶报告基因实验验证miR-92b调控的靶基因； 【结果】 1.Real-time PCR结果显示: miR-17/miR-20a/miR-20b/miR-92b/miR-106a的表达在耐药株细胞A549/DDP较非耐药株细胞A549中显著降低，与芯片结果相符合。 2.体外药物敏感性试验表明，上调miR-17/miR-20a/miR-20b/miR-92b/miR-106a的表达，A549/DDP细胞对DDP的敏感性显著增加，而下调miR-17/miR-20a/miR-20b/miR-92b/miR-106a的表达后，只有miR-92b可降低A549细胞对DDP的敏感性。 3.因此，我们选择miR-92b做为我们研究的microRNA，通过生物信息学预测，从miR-92b调控的众多靶基因中，挑选出DNA损伤修复基因RAD21及REV3L作为研究的靶基因。 4.与对照细胞相比，转染miR-92b核苷酸模拟物的A549/DDP细胞的RAD21及REV3L mRNA,但蛋白水平未见明显减低。转染miR-92b反义寡核苷酸抑制物的A549细胞的RAD21及REV3L mRNA及RAD21的蛋白水平均表达上调,miR-92b通过结合克隆于荧光素酶基因编码区下游的RAD21及REV3L3’UTR的靶位点，抑制荧光素酶表达，而使靶点序列突变后可解除mir-92b对荧光素酶表达的抑制效应。 【结论】 1．miR-17-92家族中很多成员与肿瘤发生有关，但其在肿瘤细胞耐药方面可能扮演着不同角色； 2. miR-92b参与调节肺腺癌细胞多药耐药表型，其可能机制是其负向调控靶基因RAD21的表达，从而影响肺癌细胞对化疗药物的敏感性。