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背景TGF-β/SMAD信号通路作为一种肿瘤抑制信号，在多种实体瘤中有降低或者异常表达，在白血病中也有异常表达。TGF-β/SMAD信号通路中的组分突变失活或者其下游靶基因的表达失调可导致TGF-β/SMAD信号通路受阻，白血病细胞异常增殖，分化受阻。大量的证据表明，TGF-β/SMAD信号通路在TGF-β、维生素D及全反式维甲酸（ATRA）诱导白血病细胞分化过程中发挥了关键的作用。此外，上游的多种转录因子也可以调节TGF-β/SMAD信号通路的转导，如早期生长反应因子1(Early growth response factor1，Egr-1)和Wilms肿瘤基因1（The Wilms’ tumour1，WT1))等。另外，有文献报道，Egr-1和WT1编码的蛋白的结构中均含有相似的锌指结构域，二者具有广泛的同源性。这些因子编码的的蛋白与TGF-β1的启动子区域有相应的结合位点，通过结合到靶基因上相应的DNA结合区域来调控其转录。P21是位于P53基因下游的细胞周期素依赖性激酶抑制因子，主要发挥抑癌的作用。研究表明：P21与肿瘤的分化有密切的关系。在白血病细胞中，P21处于低表达的水平，可能与其在转录及翻译后水平的表达调控异常有关。根据文献报道，TGF-β可以介导P21的表达。血管内皮生长因子VEGF（Vascular endothelial growth factor）作为一种重要的促肿瘤血管生成因子，对造血微环境稳态的破坏可能导致了白血病等恶性血液病的发生。在体外实验中，VEGF促进白血病细胞的增殖，抑制其凋亡。根据文献中的报道，P21抑癌基因作为TGF-β/SMAD信号通路的靶点之一，与造血干细胞的自我更新有关，另外SMAD3蛋白可以特异性的结合到VEGF启动子区域（1006-954bp），从而负向调控VEGF转录。P21和VEGF均为TGF-β/SMAD信号通路下游的相关的靶基因，信号通过的变化必定会引起P21和VEGF的表达变化。在以上背景材料下，我们的实验以TGF-β/SMAD信号通路为切入点，设计了相关的不同的实验，来研究在不同类型白血病细胞向单核/巨噬细胞分化过程中，Egr-1和WT1对TGF-β1的调控作用及其对TGF-β/SMAD信号通路信号传递的影响。目的以TGF-β/SMAD信号通路作为研究的切入点，探讨佛波酯(PMA)诱导白血病细胞向单核-巨噬细胞方向分化后转化生长因子TGF-β1及其下游转录因子早期生长反应因子-1（Egr-1）和Wilms肿瘤基因1（WT1）的表达变化和TGF-β/SMAD信号通路的转导情况，进一步探讨Egr-1和WT1是否可以通过调控TGF-β1来影响TGF-β/SMAD信号通路。方法建立PMA诱导K562、HL-60、THP-1的白血病细胞分化的体外模型，采用CCK8法检测不同的PMA的浓度在作用不同时间后对K562细胞的增殖的影响，并计算PMA作用于K562细胞72h后的半数抑制浓度（IC50），应用Wright-Gimesa染色观察药物作用于各白血病细胞之后形态学上的变化，运用流式细胞术检测细胞分化抗原CD11b、CD14的表达变化，并进行半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测Egr-1、WT1及TGF-β/SMAD信号通路中相关因子如TGF-β1、SMAD3、SMAD4以及信号通路下游基因P21和VEGF在基因水平的相对表达趋势，同时用Western blot的方法检测Egr-1、WT1和TGF-β1在蛋白水平的相对表达情况，用染色质免疫共沉淀实验（CHIP）验证Egr-1、WT1在药物作用前后与TGF-β1的结合情况。结果不同浓度的PMA能抑制K562细胞的增殖并能促进其分化，通过计算得出PMA作用的半数抑制浓度(IC50)约为100nm/L；在光学显微镜下观察细胞形态学的变化，均出现相似的变化，细胞由悬浮状态逐渐变为贴壁生长，细胞的体积明显增大，细胞胞质的褶皱增多，核质比减少，呈现出向成熟的单核-巨噬细胞方向分化的趋势；细胞表面分化抗原CD11b、CD14的表达量升高；在mRNA水平，TGF-β/SMAD信号通路中TGF-β、 SMAD3、SMAD4的表达呈上升趋势。在mRNA和蛋白水平，WT1的表达量呈现降低的趋势，而Egr-1的表达先升高后降低，；信号通路下游基因的靶基因P21的表达量升高，而VEGF的表达量较对照组降低；CHIP实验说明在正常的白血病细胞中Egr-1与TGF-β1的启动子区域之间不结合，WT1结合于TGF-β1的启动子某一区域；而PMA作用于白血病细胞之后，Egr-1和WT1与TGF-β1启动子的结合出现逆反，即药物作用促使Egr-1结合于TGF-β1的启动子区域，而抑制了WT1与TGF-β1启动子某一位点的结合。结论在体外，PMA可以抑制白血病细胞系K562细胞的增殖。PMA作用于各白血病细胞后，细胞呈现出向成熟的单核-巨噬细胞方向分化的趋势，说明PMA具有较强的诱导K562细胞向单核-巨噬细胞系分化的作用，在此分化过程中，Egr-1可能是通过结合到TGF-β1的启动子区域，从而抑制了WT1蛋白与TGF-β1的结合，从而使TGF-β/SMAD的信号通路得到部分恢复，发挥了促进白血病分化的作用。