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目的:放射性颌骨坏死(Osteoradionecrosis of the jaws,ORNJ)是口腔和颌面部恶性肿瘤放射治疗的严重并发症,当前尚无治疗放射性颌骨坏死的金标准,也没有广泛接受的治疗指南。尽管随着牙科预防保健和放射技术的改进,近年来放射性颌骨坏死的发病率已明显下降,但是由于其在早期诊断和治疗中的困难性,仍需要我们进一步研究其复杂的发病机制,从而为临床治疗提供新的策略。本研究旨在通过体外细胞实验,检测辐照状态下成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)凋亡和增殖情况及生长停滞特异性基因6(Growth arrest-specific 6,Gas6)的基因表达及蛋白分泌变化;选用RNA干扰技术以及受体阻滞剂研究Gas6在成骨细胞前体细胞辐射损伤后凋亡及增殖中的作用。方法:1.通过CCK8检测不同辐照剂量以及辐照后不同时间点的MC3T3-E1增殖变化情况,确定细胞实验所用的辐照剂量和检测时间点,构建MC3T3-E1细胞辐照损伤模型。2.MC3T3-E1细胞辐照损伤模型中对细胞进行Annexin V/PI染色,通过流式细胞术检测辐照对MC3T3-E1凋亡影响。3.采用酶联免疫吸附测定方法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA),用以检测Gas6在9Gyγ射线照射的小鼠骨髓上清中含量变化;通过聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)和免疫荧光染色(Immunofluorescence,IF)等方法检测健康状态下MC3T3-E1中Gas6表达情况;通过实时定量PCR(Quantitative real-time PCR,q RT-PCR)和ELISA方法检测MC3T3-E1在辐照后Gas6基因表达及蛋白分泌变化。4.Gas6小分子RNA(Small interfering RNA,si RNA)干涉效果的鉴定,使用干涉效率最高的Gas6 si RNA对MC3T3-E1进行瞬时转染,以沉默Gas6的表达,然后接受9Gyγ射线照射处理,24h后通过溴脱氧尿嘧啶核苷(Bromodeoxyuridine,Brd U)掺入实验结合流式细胞术分析其对MC3T3-E1增殖的影响。5.使用Axl受体抑制剂R428处理MC3T3-E1辐照损伤模型,通过Brdu掺入实验结合流式细胞术检测Gas6作用受体阻断后对MC3T3-E1增殖的影响,以探究细胞辐射损伤修复的潜在分子机制。结果:1.CCK8实验结果显示,24h时与未照射组(Non-irradiation,-IR)相比,3Gy、6Gy和9Gy组细胞增殖能力显著下降(P<0.0001);48h时与未照射组相比,3Gy组细胞增殖能力显著下降(P=0.001),6Gy和9Gy组细胞增殖能力显著下降(P<0.0001);72h时与未照射组相比,3Gy组细胞增殖能力显著下降(P=0.0047),6Gy和9Gy组细胞增殖能力显著下降(P<0.0001)。选择检测时间点定为24h、辐照剂量为9Gy构建细胞辐照损伤模型。2.流式分析结果表明9Gyγ射线照射后细胞早期凋亡和晚期凋亡的比率均有一定程度的增高,凋亡率由9.08%±1.69%上升到15.78%±0.42%(P<0.01),即9Gyγ射线能够显著引起MC3T3-E1的凋亡,MC3T3-E1辐照损伤模型建立成功。3.与未照射组相比,照射组小鼠骨髓上清中Gas6蛋白浓度在照射后24h显著升高;琼脂糖凝胶电泳图像和免疫荧光染色结果均表明Gas6在健康MC3T3-E1中表达;q RT-PCR以及ELISA实验结果显示,9Gyγ射线照射导致MC3T3-E1细胞Gas6基因表达及蛋白分泌显著增加(P<0.01)。4.Brd U流式分析结果表明:9Gyγ射线照射后MC3T3-E1细胞内Brd U掺入率显著降低(P<0.01),沉默Gas6表达会加剧抑制辐照损伤的成骨细胞前体细胞的增殖(P<0.05)。5.Brd U流式分析结果表明:Axl受体抑制剂R428能显著抑制辐射损伤MC3T3-E1的增殖(P<0.01),提示Gas6/Axl轴在成骨前体细胞辐射损伤再生中发挥正性调控作用。结论:1.Gas6具有促进MC3T3-E1辐射损伤后细胞增殖的作用。2.Gas6/Axl轴在MC3T3-E1辐射损伤细胞增殖中发挥正性调控作用。3.Gas6/Axl可能成为辐射骨损伤治疗中促进骨再生的新型药物靶点。