一株鸽圆环病毒的全基因组序列分析及SYBR GreenⅠ荧光定量检测方法的建立

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wangcquan
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鸽圆环病毒(Pigeon circovirus,Pi CV)属圆环病毒科(Circoviridae),圆环病毒属(Circovirus),是一种单链呈环状的DNA病毒。Pi CV在赛鸽及肉鸽中感染率较高,易感染2~12月龄的青年鸽,鸽圆环病毒感染是一种接触性传染病和免疫抑制病,主要引起鸽的非特异性的临床症状。本文主要对呼和浩特市某鸽场采集的鸽子肝脏样品进行PCR检测,选取阳性样品进行全基因组扩增,得到了长度为2035bp的全组基因序列,含2个主要开放阅读框(ORF),从Pi CV全基因组序列的同源性及遗传进化树分析Pi CV-hhht20分离株,证实了Pi CV基因组存在多样性。为建立一种针对鸽圆环病毒(Pi CV)的快速诊断方法,试验根据扩增到的Pi CV的Cap基因保守序列,设计合成一对特异性引物,建立了Pi CV荧光定量PCR检测方法。结果表明:在最佳反应条件下,该方法在1×10~2~1×10~7copies/μL标准品范围内呈现良好的线性相关性,线性相关系数为0.9846;该方法最低可检测到1×10~2copies/μL标准品,比常规PCR检测灵敏100倍;特异性良好,与其他常感染的鸽病并无交叉反应;重复性评价表明,批内与批间的变异系数均小于2%;应用该方法对临床病鸽肝脏样品检测结果显示,Pi CV阳性率达75.7%,高于常规PCR方法的检测阳性率(54.1%),展现了该方法的良好适用性。可应用于对Pi CV的快速检测,为Pi CV的及时防控提供有力技术支持。
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