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目的:青光眼性视神经损伤的首发部位在视乳头筛板区,星形胶质细胞是该区域主要细胞。高眼压状态下星形胶质细胞发生活化,活化的星形胶质细胞可以通过影响细胞外基质成分,即细胞外基质重塑,导致视乳头筛板结构的改变,影响视神经轴突生存的微环境,进而引起视网膜神经节细胞的凋亡。目前活化的星形胶质细胞参与细胞外基质重塑的具体机制尚不清晰,BMPs、TGF-βs、Gremlin-1三类调控细胞外基质的因子可能参与其中。本研究通过自主研发的青光眼体外细胞加压模型处理大鼠视乳头区星形胶质细胞,观察梯度压力下星形胶质细胞活化情况,探求压力介导的活化星形胶质细胞表达BMPs、TGF-βs、Gremlin-1的变化及其对细胞外基质重塑的影响。 方法:分离并提纯大鼠视乳头区星形胶质细胞,免疫荧光鉴定后体外原代培养。20mmHg梯度压力(0,20,40,60mmHg)分别培养,各处理6,18,24小时。Real-time PCR检测BMP-4,BMP-7,TGF-β1,TGF-β2,FN,Gremlin-1,GFAP的mRNA表达,ELISA检测BMP-4,BMP-7,TGF-β1,TGF-β2,FN分泌情况,Western-blot检测Gremlin-1和GFAP蛋白表达情况。 结果:1.分离提纯的细胞为IB型星形胶质细胞;2.压力梯度下(0、20、40、60mmHg)各培养时程(6h,18h,24h)的BMP-4表达与分泌均未见明显差异;3.BMP-7的表达和分泌,在作用6h后,压力组(20、40、60mmHg)与0mmHg对照组比,明显增加,并随压力增加而增加;但在作用18h和24h后,压力组与对照组比较,逆转下降,并随压力增加而降低明显;4.在三个观察时点上,压力组与对照组比较,TGF-β1的表达和分泌增高,并随压力增加而增加;而TGF-β2的表达和分泌降低,并随压力增加而减少;5.在三个观察时点上,压力组与对照组比较,FN的表达和分泌增高并随压力增加而增加;6.在三个观察时点上,压力组与对照组比较,Gremlin-1和GFAP的mRNA和蛋白表达增高,并随压力增加而增加。 结论:1.压力作用于星形胶质细胞后,星形胶质细胞发生活化;2.压力作用下星形胶质细胞产生的细胞外基质调节因子BMP-7、TGF-β1、TGF-β2、Gremlin-1的表达发生改变;3.压力作用下细胞外基质中的纤维连接蛋白的表达上调,压力作用可引起星形胶质细胞细胞外基质异常,或可发生细胞外基质重塑;4.星形胶质细胞BMP-4的表达和分泌不受压力影响。