以肿瘤细胞为模版的多酚-铝配位微颗粒疫苗制备方法及肿瘤免疫治疗效果

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目的:促进抗原提呈细胞摄取、呈递肿瘤抗原,是构建肿瘤疫苗需要考虑的重要因素。单纯的肿瘤抗原免疫原性差,采用合适的负载体系对于增强抗原的摄取、提呈,特别是诱导T细胞免疫应答是非常重要的。本文通过多酚金属的络合作用,以单个细胞为模版,构建了负载肿瘤细胞裂解物的微颗粒体系,该体系能够有效刺激抗原提呈细胞对肿瘤抗原的吞噬提呈并激活细胞免疫反应。本工作提供了一种通用、简单、有效的肿瘤抗原包封策略,将单个肿瘤细胞包埋得到肿瘤疫苗,可以用于个体化免疫治疗。方法:通过透射电镜,扫描电镜,共聚焦显微镜观察TCL@EGCG/AIn微颗粒结构;利用X射线光电子能谱(XPS)及X射线能谱(EDS)检测其组成成分;利用BCA法测定TCL@EGCG/AIn的蛋白负载能力及在不同pH环境下的蛋白释放情况;通过激光共聚焦显微镜(Laser Scanning Confocal Microscopy,LSCM)及流式细胞技术(Fluorescence Activated Cell Sorter,FACS)分析 DC 细胞对 TCL@EGCG/AIn的摄取;通过活体成像观察TCL@EGCG/AIn负载的抗原蛋白在体内的迁移情况;采用流式细胞仪检测TCL@EGCG/AIn促进骨髓来源树突状细胞成熟的能力;通过动物实验模型观察其预防治疗以及抑制肿瘤转移的效果。结论:成功制备了 EGCG/AI包裹肿瘤细胞裂解物的微颗粒疫苗,并确定了其形貌成球状。该微颗粒疫苗具有较高的蛋白负载量及pH响应性蛋白释放特性,在pH 5.5时释放较快。细胞毒性结果显示该具有良好的生物相容性,可以被BMDCs细胞摄取,并活化刺激BMDCs成熟。皮下注射微颗粒疫苗后6 h迁移至淋巴结,48小时内荧光不消失。动物实验结果表明该微颗粒疫苗在一定程度上可以预防和抑制肿瘤的生长和转移。
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