基于NRF2和PGC-1α信号通路的安五脂素抗小鼠疲劳作用研究

来源 :北华大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:jiangshan1017
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目的:明确安五脂素对运动性疲劳小鼠的抗疲劳作用并探讨该作用与核因子E2相关因子2(Nuclear factor erythroid-2 related factor 2,NRF2)及过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子-1α(Peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator-1α,PGC-1α)信号通路调节相关作用机制。方法:将80只雄性ICR小鼠随机分为以下4组,即空白对照组(SED-Con组,0.5%羧甲基纤维素钠灌胃,静坐实验),运动性疲劳模型组(MOD-Con组,0.5%羧甲基纤维素钠灌胃,力竭性运动实验),安五脂素空白组(SED-Anwu组,安五脂素4 mg/kg灌胃,静坐实验)及安五脂素模型组(MOD-Anwu组,安五脂素4 mg/kg灌胃,力竭性运动实验),持续给药7周,训练前一小时给药,每日给药一次。通过负重游泳实验,疲劳转棒实验,前肢握力实验及悬尾实验观察安五脂素对小鼠运动耐力的影响,通过化学比色法检测小鼠血清中尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)、乳酸(Lactic acid,LD)、乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)、肌酸激酶(Creatine kinase,CK)、血清磷(Inorganic phosphate,Pi)、肝脏及骨骼肌组织中肝糖原(Liver glycogen,LG)、肌糖原(Muscle glycogen,MG);检测小鼠血清及骨骼肌中超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(Melondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)以及过氧化氢酶(Catalase,CAT)含量;通过酶联免疫检测法(ELISA)检测小鼠血清及骨骼肌中硫代巴比妥酸反应物(Thiobarbituric acid reactive substances,TBARS)、8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy-2deoxyguanosine,8-OHdG)和活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平的变化;HE染色观察安五脂素对小鼠腓肠肌组织病理学改变的影响;免疫组织化学法检测腓肠肌组织中NRF2、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白表达情况,Western blot法观察小鼠骨骼肌组织中胞浆蛋白伴侣分子Keap1(Kelch-like ECH-associated protein 1,Keap1)、NRF2、血红素加氧酶1(Heme oxygenase-1,HO-1)、还原型辅酶I(II)醌氧化还原酶1(NAD(P)H:quinine oxidoreductase 1,NQO1)、Bcl-2、BCL2-Associated X蛋白(BCL2-Associated X,Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase3)、单磷酸腺苷(AMP)激活的蛋白激酶(Adenosine 5’-monophosphate(AMP)-activated protein kinase,AMPK)、磷酸化单磷酸腺苷(AMP)激活的蛋白激酶(Phosphorylation adenosine 5’-monophosphate(AMP)-activated protein kinase,p-AMPK)、PGC-1α、核因子E2相关因子1(Nuclear factor erythroid-2 related factor1,NRF1)、线粒体转录因子A(Mitochondrial transcription factor A,TFAM)蛋白表达。结果:与SED-Con组相比,MOD-Con组小鼠运动耐力显著降低(p<0.05或p<0.01),BUN、LD、LDH、CK、Pi、MDA、TBARS、8-OHdG以及ROS水平均显著上升(p<0.05或p<0.01),LG、MG、SOD、CAT以及GSH-Px水平均显著下降(p<0.05或p<0.01);与MOD-Con组相比,MOD-Anwu组的运动耐力均显著增加(p<0.05或p<0.01),BUN、LD、LDH、CK、Pi、MDA、TBARS、8-OHdG以及ROS水平均显著降低(p<0.05或p<0.01),LG、MG、SOD、CAT以及GSH-Px水平均显著增加(p<0.05或p<0.01),免疫组化法检测腓肠肌组织中NRF2及Bcl-2表达均显著增加,Western blot法结果显示NRF2、Bcl-2、p-AMPK、PGC-1α、NRF1、TFAM、HO-1表达均显著增加(p<0.05或p<0.01),Keap1、Bax、Caspase3表达显著降低(p<0.05或p<0.01)。结论:安五脂素具有抗小鼠运动性疲劳的作用;该作用可能与其调节骨骼肌组织中NRF2/ARE以及AMPK/PGC-1α通路相关蛋白表达有关;本项研究将为开发含有五味子的抗疲劳保健食品提供了实验依据。
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