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多糖和硒均具有许多生物活性,对很多疾病都有防治作用,近年来对它们的研究已经较为深入。硒多糖是一种新的有机化合物,研究发现硒多糖具有多种生理活性如拮抗重金属毒性、抗氧化、抗肿瘤、抗诱变等。目前对大蒜硒多糖,箬叶硒多糖,螺旋藻硒多糖的研究较为深入,而从灵芝菌丝体中提取硒多糖并抗癌活性在国内外尚处于起步阶段。 本论文首先证实了灵芝硒多糖能够诱导K562细胞凋亡。从富硒灵芝菌丝体中提取出灵芝硒多糖,将其作用于体外培养的K562细胞,继续培养72小时后,用MTT法检测细胞的存活率;通过光学显微镜和透射电镜直接观察SeGLP-2B,SeGLP-3B作用后K562细胞的形态变化;琼脂糖凝胶电泳法观察细胞凋亡特征DNA梯状带;流式细胞仪检测SeGLP-2B,SeGLP-3B对K562细胞周期的影响以及细胞凋亡率。结果显示灵芝硒多糖SeGLP-2B,SeGLP-3B能抑制K562细胞的增殖,IC50分别为0.031 g·L-1和0.057g·L-1;电镜下可以观察到细胞皱缩变小,胞浆致密,核固缩,染色质浓集、边聚等凋亡细胞的特征:其DNA电泳呈现典型的DNA梯度条带;流式细胞术分析显示,经灵芝硒多糖作用后,S期DNA的含量远远低于G1期二倍,说明灵芝硒多糖对K562细胞周期的作用点在G1期到S期的关键点上。 本论文还初步探讨了SeGLP-2B,SeGLP-3B诱导K562细胞凋亡的分子机制:采用比色法测定SeGLP-2B,SeGLP-3B作用72h后K562细胞中caspase系列酶的活性变化;MTT法分析caspase-3,caspase-8抑制剂对SeGLP-2B,SeGLP-3B诱导凋亡的影响;western blot法检测caspase-3,caspase-8,caspase-9前体及其活化片断的表达。结果表明:经SeGLP-2B,SeGLP-3B作用72小时后K562细胞caspase-3,caspase-8,caspase-9活力均有不同程度增强;caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK和caspase-8抑制剂Z-IETD-FMK均能减弱SeGLP-2B,SeGLP-3B对K562细胞的生长抑制作用;western