鄂西北地区重楼质量控制和品质评价研究

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目的:重楼分布广泛,化学物质丰富,药用价值高,野生资源紧张,药用重楼质量差异较大,而临床有多种药品以重楼入药,重楼药材的质量控制与品质评价就显得尤为重要。本文通过对鄂西北地区现有野生重楼进行资源调查和品种鉴定,重楼常规含量测定和重楼皂苷提取测定,建立稳定可靠的重楼高效液相指纹图谱方法,采用相似度评价、聚类分析、主成分分析等方法对不同产地重楼质量进行比较评价,增强重楼质量控制的可行性。可为中药原材料的选择和临床应用提供基础,为重楼人工规范化种植提供参考,解决药材野生资源不足的现状。方法:(1)资源调查和品种鉴定:包括资源调查、样品采集、鉴定分类、不同种属重楼形态学差异比较、重楼不同亚属的识别、DNA条形码鉴别;(2)含量测定:参照2015版《中国药典》一部附录所述方法,对重楼的常规检查项目(水分、灰分、酸不溶性灰分)进行测定,利用正交试验优化重楼皂苷提取测定方法,利用HPLC法测定重楼中多种皂苷的含量,建立重楼质量控制的客观指标;(3)质量控制和品质评价:建立重楼的高效液相色谱指纹图谱,采用相似度评价、聚类分析、主成分分析等方法对不同产地重楼质量进行比较评价,旨在反映重楼的内在化学信息,对鄂西北地区重楼质量进行全面评价。结果:(1)采集鄂西北地区野生重楼种质资源27个,经鉴定为7个侧膜亚属;通过观察比较发现不同种属重楼形态学差异明显,可根据不同重楼子房横切面胚珠子房着生方式和种子差异来进行亚属识别;ITS2二级结构含有一个主环和4个螺旋区,每个螺旋上又有数量不等大小不一的茎环结构,通过ITS2的二级结构可以简洁明了的对重楼属植物进行区分;(2)采集的29批次野生重楼样品的常规检查项目(水分、灰分、酸不溶性灰分)全部符合药典规定;重楼的最佳测定方法为在203nm波长条件下以0.05%H3PO4-乙腈为流动相梯度洗脱120min,重楼皂苷的最佳提取方法为乙醇水浴加热回流两次(1.5h,1h);建立了12批野生重楼药材HPLC指纹图谱;(3)对29批次重楼样品活性成分信息进行精确分析,结果表明采集的重楼样品仅有8批次符合药典规定,合格率仅为28%,质量较差,但其中茅箭区马家河龙王寨重楼药材质量较好;利用高效液相指纹图谱法,对采集12批野生重楼样品进行化学成分整体信息进行考察,结果表明重楼药材HPLC指纹图谱有12个共有峰,采用相似度软件进行分析表明其相似度结果在0.6270.908之间。结论:(1)鄂西北地区自然条件优越,重楼资源丰富,盛产七叶一枝花,在湖北竹溪发现的特有品种竹溪重楼由学者李恒亲自鉴定命名,在伏龙山基地发现的品种亮叶重楼及球药隔重楼被收载于《重楼属植物》中;通过观察比较发现不同种属重楼形态学差异明显,可根据这些差异更加方便快捷对重楼进行鉴定;根据不同重楼子房横切面胚珠子房着生方式和种子差异可进行重楼亚属的有效识别;ITS2作为DNA条形码序列可以有效的区分重楼属植物,利用ITS2的种内鉴别研究可以进行遗传距离分析,在重楼规范化种植过程中可用于种质种源的正确鉴定和筛选并起监控作用;(2)所建立方法与药典记载方法比较,测定结果相近但提高了分析效率,反映的重楼信息更全面,能客观有效地评价不同产地重楼药材的质量,可作为重楼品质评价的有利手段;鄂西北地区不同产地品种的重楼皂苷含量不同,有较多产地重楼质量都达不到药典要求,相同产地的所有样品中竹溪重楼和七叶一枝花皂苷含量较高,质量较好,可以作为规范化种植种源,新发现的竹溪重楼有很高研究价值,可考虑作为新的药源进行推广种植;(3)12批药材的相似度为0.6270.908,可将相似度在0.8001.000的归为一类,将低于0.7的归为一类;聚类分析结果显示,12批次重楼药材可被分为两类,其中毛重楼与七叶一枝花的亲缘关系较近,分为一支,竹溪重楼单独分为另一支,可以利用聚类分析方法来判断亲缘关系。
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