论文部分内容阅读
目的:本研究旨在从分子生物学角度探讨lncRNA SH3BP5-AS1单核苷酸多态性rs11713836和rs2046725与缺血性中风(ischemic stroke,IS)及其中医证候和部分临床指标的关联。方法:本研究以2016年至2019年期间收集的774例缺血性中风患者为病例组,以同一个时间段纳入的793例健康人群以及患非神经系统疾病病情轻微的患者为对照组。采用《中风病辨证诊断标准(试行)》量表进行证候评分,综合得分≥7分表示中医证候诊断已经确立。采集IS组及非IS组信息资料,包括(1)年龄等一般信息;(2)本次发病的情况;(3)头颅MRI+DWI等影像学资料;(4)生活习惯和环境:是否烹饪,是否喝茶等;(5)既往史、家族史;(6)血清指标(同型半胱氨酸、血脂、血糖、尿酸、凝血功能、C反应蛋白);(7)血压、中医证候评分。将临床资料信息录入Excel及Epidata软件建立临床信息数据库。收集IS患者及对照组空腹外周血,进行DNA提取,使用Agena平台的Mass ARRAY SNP基因分型技术对lncRNA SH3BP5-AS1多态性rs11713836和rs2046725进行分型检测。采用PLINK、SPSS18.0软件进行统计分析。结果:1、哈温平衡(HWE)及基因型频率分布如表2所示,非IS组在lncRNA SH3BP5-AS1 rs11713836和rs2046725基因型分布上符合哈温平衡定律(PHWE=0.053);IS与非IS组,以及IS中医证候组与非IS组的lncRNA SH3BP5-AS1 rs11713836和rs2046725基因型频率分布无显著差异。2、IS组与非IS组性别、年龄对比以及IS组中医证候分布纳入的所有IS患者与非IS组在年龄分布(P=0.561)、性别构成(P=0.093)无显著差异。IS组证候分布如下:气虚证86例,338例痰证,风证有307例,阴虚阳亢证只有17例;血瘀证有171例,88例火热证。各证候积分(分)情况如下:痰证9.99±2.512;风证9.53±2.75;血瘀证8.63±1.727;气虚证7.94±1.612;火热证8.8±1.907;阴虚阳亢证11.17±3.666。3、lncRNA SH3BP5-AS1 SNP位点rs11713836和rs2046725与IS发生风险的关联分析如表3所示,在等位基因(Allelic,All)模型、显性(Dominant,Dom)模型、加性(Additive,Add)模型、隐性(Recessive,Rec)模型四个遗传模型中,lncRNA SH3BP5-AS1 SNP rs11713836和rs2046725与IS发生风险无显著关联(均P>0.05)。进行亚组分析发现rs11713836和rs2046725与IS女性、IS男性均无显著关联(见表4-1、4-2)。4、lncRNA SH3BP5-AS1单核苷酸多态性rs11713836-rs2046725单体型与IS发生风险的相关分析rs11713836-rs2046725可构建3种单体型,分别是A-G、G-G、G-A。IS组及非IS组的三个单体型频率无显著差异(见表5-1)。亚组分析结果显示,IS男性与非IS组男性单体型频率未见显著差异,IS女性与非IS组女性亦未见显著差异(见表5-2、5-3)。5、lncRNA SH3BP5-AS1单核苷酸多态性rs11713836和rs2046725与缺血性中风各证候的发生风险的关联分析如表6-1所示,rs11713836和rs2046725和IS血瘀证的发生风险的关联差异均有统计学意义[rs11713836:Rec模型:P=0.028;rs2046725:Rec模型:P=0.025]。rs11713836和rs2046725与风证、火热证、痰证、气虚证均未体现显著关联性。如表6-2所示,校正两个协变量后,两个位点与缺血性中风血瘀证仍有显著关联,仍然未见两个位点与风证、火热证、痰证、气虚证存在显著关联。6、lncRNA SH3BP5-AS1 SNP位点rs11713836和rs2046725与缺血性中风患者的凝血功能的关联性分析表7-1显示,Dom模型下,rs11713836与IS患者血清FIB水平显著关联(P=0.012)。表7-2显示经过校正后,rs11713836与IS患者FIB水平显示存在显著关联(Add:Padj=0.046,Dom:Padj=0.007)。表7-3、7-4显示,在Dom模型下rs2046725与IS患者FIB水平显著相关(P=0.029)。然而,rs11713836和rs2046725均与IS患者其他凝血指标无显著关联(均P>0.05)。7、lncRNA SH3BP5-AS1 SNP位点rs11713836和rs2046725与缺血性中风患者血脂水平的关联性分析(1)如表8-1所示,rs11713836与缺血性中风患者血清VLDL、TG和APO-B水平显著相关[Add、Dom、Res模型下VLDL、TG均P<0.05,APO-B在加性模型下经过校正后P=0.032]。(2)如表8-2所示,SH3BP5-AS1 SNP位点rs2046725与IS患者VLDL、LDL、TG、APO-B、TC水平显著相关。VLDL:Add模型下P=0.002,Dom模型下P=0.029,Rec模型下P=0.003。Add模型下(APO-B:P=0.017;TG:P=0.010;TC:P=0.011);Rec模型下(APO-B:P=0.001;TG:P=0.010;TC:P=0.003;LDL:P=0.014)。调整性别、年龄后以上关联依然有统计学意义。8、lncRNA SH3BP5-AS1 SNP位点rs11713836和rs2046725与IS患者血压、血糖、CRP、UA、Hcy的关联分析在各个遗传模型上rs11713836和rs2046725与IS患者血糖(表9-1、9-2)、血压(表10-1、10-2)、CRP(表11-1)、UA(表11-2)、Hcy(表11-3)均不存在显著关联(均P>0.05)。9、lncRNA SH3BP5-AS1 SNP位点rs11713836和rs2046725与IS血瘀证患者的血脂、凝血功能的关联性分析表14-1、14-2显示,rs11713836与IS血瘀证患者FIB存在显著关联(Dom模型显示P=0.043;Add模型结果显示P=0.033)。rs2046725与IS血瘀证患者凝血指标未见显著差异性(表14-3、14-4)。表15-1显示,lncRNA SH3BP5-AS1 rs11713836位点与IS血瘀证患者LDL、VLDL水平存在显著差异性。rs2046725位点与IS血瘀证患者TG、LDL、VLDL水平有显著关联(表15-2)。10、lncRNA SH3BP5-AS1 SNP位点rs11713836和rs2046725与IS血瘀证患者的血压、血糖、CRP、UA、Hcy的关联性分析在各个遗传模型上rs11713836和rs2046725与IS血瘀证患者的血糖(表12)、血压(表13)、CRP、UA、Hcy(表16)水平均未见显著关联。结论:(1)lncRNA SH3BP5-AS1 SNP位点rs11713836、rs2046725与缺血性中风血瘀证发生风险相关,而与其他证候无关。(2)lncRNA SH3BP5-AS1多态性rs11713836和rs2046725与IS患者血脂代谢、凝血功能有关,而与IS患者血压、血糖、CRP、UA、Hcy无关。