CePO4:Tb纳米棒的制备及用于磷酸酶活性检测研究

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碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)能够催化蛋白质、核酸和小分子的去磷酸化过程,在哺乳动物的体液和组织中广泛存在,是一种重要的生物酶。ALP的异常表达与诸多疾病有关,如骨疾病、糖尿病、前列腺癌症和肝脏功能性障碍等,因此 ALP 成为临床实践中最广泛分析的一种酶。目前,已有多种方法用来检测碱性磷酸酶,如比色法、电化学法、表面增强拉曼散射光谱法、荧光法等。然而,这些方法往往存在一些缺陷,如需要繁复的修饰过程,易受外界条件的干扰,检测不够灵敏和检测线性范围窄等,从而限制了广泛使用。因此,开发简单、快速、无需标记、高灵敏度和良好选择性的ALP检测方法具有重要意义。  稀土磷酸盐纳米粒子因其具有独特的光学特性,如长发光寿命、高量子产率、低光漂白性、低毒性和高化学稳定性等,在生物传感领域有着良好的发展前景。本论文合成了稀土发光纳米材料-CePO4:Tb 纳米棒,并将其用于碱性磷酸酶的检测。本论文主要包含以下内容:  1、采用简单、温和的方法合成了稀土发光纳米材料。通过 TEM对稀土发光纳米材料进行了表征,结果显示,稀土发光纳米材料是直径约为 5-7 n m,长度约为 50-80 nm的单分散纳米棒;用荧光光谱对其进行光学性质表征,结果表明,这种CePO4:Tb纳米棒具有良好的发光性能,在494,548,590,624 nm处出现了Tb3+的特征发射带,它们分别是由Tb3+的5D4→7F6,5D4→7F5,5D4→7F4,5D4→7F3的4f-4f跃迁产生。在240~290 nm激发范围内,最大发射峰没有明显的变化,最大激发波长为270 nm。  2、柠檬酸还原制备的AuNPs,表面具有丰富的羧基,能与CePO4:Tb发生配位作用,将 AuNPs 组装到 CePO4:Tb 纳米棒表面,导致 CePO4:Tb的荧光猝灭。当加入焦磷酸根(PPi)时,由于 PPi与 CePO4:Tb 纳米棒之间的亲和作用力强于AuNPs与CePO4:Tb纳米棒之间的作用力,导致AuNPs与 CePO4:Tb形成的组装体解体,CePO4:Tb纳米棒的荧光恢复。当存在 ALP时,ALP 将 PPi 水解为 Pi,AuNPs 与 CePO4:Tb 重新形成组装体,导致CePO4:Tb 纳米棒的荧光再次猝灭。据此,本论文以制备的CePO4:Tb 纳米棒为荧光探针,构建了一种快速灵敏免标记检测 ALP的新方法。
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