论文部分内容阅读
【目的】将Wistar成鼠自体激活雪旺细胞进行体外培养，并联合氯化锂对急性脊髓损伤动物模型进行治疗，对脊髓损伤恢复情况进行行为学、神经电生理学和组织学评价，探讨氯化锂联合移植自体激活雪旺细胞在治疗脊髓损伤中的作用，评价该方法的疗效。【方法】通过结扎双侧隐神经激活自体雪旺细胞并进行体外分离、培养、纯化，测定不同培养时期培养基中NGF、BDNF含量变化。Wistar大鼠48只以改良Allens’法建立T10急性脊髓损伤模型。随机分为4组，每组12只：单纯DMEM移植空白对照组、氯化锂腹腔注射组、自体激活雪旺细胞（autologus activated schwann cells，AASCs）移植组和氯化锂联合AASCs组。术后每周每组随机选取5只大鼠采用NICOLET Viking IVB型肌电图仪进行体感诱发电位（Somatosensory evoked potential，SEP）和运动诱发电位（Motion evoked potential，MEP）检查，与正常鼠比较。术后每周每组随机选取8只对实验动物进行功能评价（BBB行为功能评分）。12周后每组随机选择2只动物进行10％BDA神经顺行示踪标记，标记2周后（术后14周）处死动物。取出动物损伤段脊髓作5μm快速冰冻切片后，进行Cy3荧光染色、荧光免疫组化及HE染色，切片染色用显微图像分析软件Image pro plus分析处理。比较各组的统计学差异。【结果】自体激活雪旺细胞经分离纯化后在体外稳定传4代，生长状态良好。术后4周BBB行为功能评分实验组较对照组功能恢复明显，各组之间差异有统计学意义（ANOVA检验，P＜0.05）。术后起体感诱发电位检查，联合移植组和自体激活雪旺细胞移植组以及单纯氯化锂组组间差异有统计学意义（p＜0.05）；BDA顺行示踪，HE染色、荧光免疫组化染色显示联合移植组和雪旺细胞移植组较单纯氯化锂组有较多的神经纤维穿过缺损部位，而空白对照组几乎未见再生神经纤维穿越，各组间差异有统计学意义（p＜0.05）。【结论】自体激活雪旺细胞可分泌大量神经营养因子，并能明显促进急性脊髓损伤后的轴突再生和肢体功能恢复；氯化锂具有神经保护功能，在脊髓损伤后应用氯化锂连续1周腹腔注射可以改善功能恢复。氯化锂联合自体激活雪旺细胞治疗脊髓损伤能促进轴突再生，显著改善脊髓损伤后的功能恢复。