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摘要：近年来，国内外报道的由食源性致病菌引起的食物中毒事件越来越多。阪崎肠杆菌、单增李斯特菌和志贺氏菌都属于食源性致病菌。误食之后引起人类各种疾病，危及生命。为了确保食品的安全性，需要大力加强食品的检验力度，建立快速、灵敏的检测手段。本论文以建立快速检测这三种致病菌的LAMP方法为主要研究目的，为食品安全的快速检测提供技术支持。本研究针对阪崎肠杆菌16S/23S rDNA IGS序列（NCBI登录号AY748354.1），单增李斯特菌iap基因（NCBI登录号NC003210.1），志贺氏菌ipaH基因（NCBI登录号HE616529.1）分别设计LAMP特异性引物，内引物FIP/BIP，外引物F3/B3。同样区域设计荧光定量PCR引物，构建标准质粒。对建立的LAMP反应体系进行条件优化，确定其反应体系为：10mmol/L内引物（FIP&BIP），10mmol/L外引物（F3&B3），10mmol/LdNTPs，5M Betaine，16mmol/L MgSO4，20mmol/LKCl，20mmol/L （NH4）2SO4，0.2%TritonX-100，8U Bst DNA Polymerase，1μL DNA模板，双蒸水补足25μL总体积。在67℃保温60min。实验结果可通过三种方式鉴定，直接肉眼观察是否有白色沉淀产生或浑浊度变化，添加荧光染料SYBR Green I1μL，在紫外透射仪下观察是否有绿色荧光反射，同样也可将反应产物凝胶电泳，是否有梯形条带产生。对设计的三个菌的LAMP引物做了特异性实验和灵敏度实验。实验结果显示，三组引物特异性良好，灵敏度试验中梯度稀释DNA模板，阪崎肠杆菌的检出限为91fg/uL，单增李斯特菌的检出限为9.6fg/uL，志贺氏菌的检出限为27.5fg/uL。在模拟食样实验中，分别单独用单增李斯特菌、阪崎肠杆菌、志贺氏菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌增菌液人工污染脱脂乳，用煮沸法粗提取基因组，用LAMP方法与荧光定量PCR方法做参照检测特异性，实验结果显示，能准确检测出引物所对应的菌种，且阪崎肠杆菌LAMP方法的检出限为101CFU/mL，荧光定量PCR的检出限为102CFU/mL；单增李斯特菌LAMP方法的检出限为3×100CFU/mL，荧光定量PCR的检出限为3×101CFU/mL；志贺氏菌LAMP方法的检出限为4×100CFU/mL，荧光定量PCR的检出限为4×101CFU/mL。LAMP检测方法不仅能达到荧光定量PCR方法的准确性，而且检测限更低，灵敏度更高。实际样品检测样中，分别与阪崎肠杆菌、单增李斯特菌、志贺氏菌行业标准检测法（sN/T1632.1-2005[v6]）做比较，结果表明：76份奶粉中阪崎肠杆菌，LAMP方法的阳性检出率为3.95%，检出时间为l.5h。76份奶粉中志贺氏菌，LAMP方法的阳性检出率为3.95%，检出时间为l.5h。54件肉制品中，单增李斯特菌的LAMP方法的阳性检出率为13.0%，检出时间为2.0h。LAMP方法在对样品的检测更加灵敏，且更省时。本研究分别建立了阪崎肠杆菌、单增李斯特菌和志贺氏菌的LAMP快速检测方法，开发单增李斯特菌LAMP快速检测试剂盒，建立三种LAMP反应结果目测方法，基本实现了现场快速检测的目标。该方法特异性强，灵敏度高，检测时间短，为食品中致病菌的检测提供了一个新的检测平台，为检测机构推广此技术提供了技术支持。