乳腺癌肿瘤细胞的试纸条快速检测方法研究

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乳腺癌是一种现代女性的高发性疾病。乳腺癌肿瘤形成时细胞会有脱落,进入血液中,随着血液循环到全身各处。当生长环境合适时,某些细胞就会驻留在淋巴或者器官上,可能形成肿瘤灶点。因此检测乳腺癌肿瘤细胞对于预防肿瘤复发转移有重要的意义,而目前对细胞水平上的检测一般都要借助大型仪器,耗时长,有必要建立更加快速、准确、灵敏的细胞检测方法。试纸条检测是目前最为方便快捷的检测方法,传统的试纸条对于细胞的检测,检测限较低,有必要深入建立试纸条检测乳腺癌肿瘤细胞的方法。论文以传统的胶体金渗滤法以及胶体金的光热效应为基础,通过对细胞的特异性免疫捕获,激光照射纳米金产热和微孔膜、磁性微球的多重筛选,实现在试纸条上对乳腺癌肿瘤细胞的检测,具有方便、快速、可以对细胞定量分析,易于实现的优点。论文主要包括四个部分,内容如下:第一章绪论部分对乳腺癌以及乳腺癌肿瘤细胞检测的意义、试纸条快速检测的基本概念以及分类进行了概述。论述了当前肿瘤细胞的检测方法以及当前试纸条检测细胞的方法研究进展。第二章建立了一种快速检测乳腺癌肿瘤细胞的胶体金光热效应渗滤试纸的方法。首先合成了胶体金以及金标抗体,优化缓冲液条件以及激光照射时间,确定了传统胶体金渗滤法以及胶体金光热效应渗滤试纸检测MCF-7细胞的最低检出限,建立了胶体金光热效应渗滤试纸检测MCF-7细胞的标准曲线,得到线性回归方程:y=2.4×10(-5x)+0.0326,R2=0.9894。第三章建立了另一种胶体金-磁球膜过滤试纸快速检测乳腺癌肿瘤细胞的方法。该方法主要利用磁性微球的磁分离特性以及微孔膜的过滤筛选作用,结合胶体金的光热效应,通过优化金标Anti-EpCAM以及磁球-二抗的浓度,确定了胶体金-磁球膜过滤法检测MCF-7细胞的最低检出限,建立了该方法检测MCF-7细胞的标准曲线,得到线性回归方程:y=1.6×10(-5x)+0.1925,R2=0.9929。第四章总结、比较和分析了前两章所建立的两种检测乳腺癌肿瘤细胞的新方法。胶体金光热效应渗滤试纸方便快捷、操作简单,但对于MCF-7细胞的检测限为6000个,灵敏度较低,重现性较差,需要再进一步研究;胶体金磁球膜过滤试纸对MCF-7细胞的检测限为1500个,灵敏度相对较高,对细胞的特异性识别、磁分离以及微孔膜的筛选纯化使结果的可信度更高,可进一步整合实验方案优化其他条件来提高检测灵敏度。
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