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脑卒中是严重危害人类健康的重大疾病之一，随着人口老龄化社会的到来，其高发病率、致死率和致残率，已渐居各种疾病之首。脑缺血是脑卒中最为常见的发病类型。因此，对脑缺血的发病机制、预防和救治的研究是当前国内外亟待解决的重大课题。谷氨酸（glutamate,Glu）是中枢神经系统主要的兴奋性递质，但其过度释放又可引起神经元损伤。脑缺血/再灌注(ischemia/reperfusion, I/R) 损伤的主要通路就是细胞外谷氨酸水平升高→N-甲基-D-天冬氨酸（N-methyl-D-aspartate,NMDA）受体的过度激活→细胞内钙超载→一氧化氮合酶（nitric oxide synthase, NOS）激活→自由基、一氧化氮(nitric oxide, NO) 及过氧亚硝基阴离子（ONOO-）的大量产生。针对这一通路诸环节损伤机制的基础研究或神经保护剂的开发研究，是当前国际上的研究热点。胆囊收缩素（cholecystokinin, CCK）广泛存在于人和动物的胃肠道和中枢神经系统，是一种典型的脑肠肽,也是脑中含量最丰富的神经肽之一。CCK在脑中以神经递质或调质的形式参与了多种生理及病理过程。CCK以多种分子形式存在，其中硫酸化的羧基端8肽胆囊收缩素（cholecystokinin-octapeptide, CCK-8）是CCK在脑中的主要存在形式，也是具有CCK完全生物学功能的最小活性片段。目前发现，主要有两种不同的CCK受体，即CCK A型受体（CCK-AR）和CCK B型受体（CCK-BR）。CCK-BR在脑中分布广泛，而CCK-AR仅零散分布于某些脑区。近年来研究发现CCK具有多方面的抗损伤作用，如抗胃肠道I/R损伤、抗癫痫 、拮抗Glu的神经毒性，减轻乙酰胆碱能神经元损伤等作用。有关CCK和脑缺血关系的研究很少，究竟是CCK还是其受体拮抗剂具有抗脑缺血的作用，尚存异议。CCK是否可通过影响Glu损伤通路，而减轻动物局部脑缺血 (focal cerebral ischemia, FCI)/再灌注(FCI/reperfusion, FCI/R)损伤，迄今未见报道。FCI或再灌注时，血液、脑组织CCK-8水平及其受体表达的变化规律，也不清楚。<WP=6>本实验采用栓线法大鼠FCI/R模型，通过侧脑室内（intracerebroventricular, icv）注射CCK-8或其受体拮抗剂，从形态、功能及代谢水平研究了CCK-8抗FCI/R损伤的作用及其受体机制；并在整体及离体水平，采用生物化学、免疫组织化学、分子生物学、放射免疫检测等手段，对CCK-8抗FCI/R损伤的机制进行探讨。1 CCK-8减轻大鼠FCI/R损伤1.1 CCK-8 对FCI/R损伤引起的大鼠脑形态学改变的影响观察CCK-8或其非特异性受体拮抗剂－丙谷胺（proglumide, Pro）对大鼠FCI/R所致脑形态学改变及脑梗死体积的影响。健康雄性SD大鼠(250g～290g), 用10%水合氯醛麻醉（350mg/kg, ip）后，采用栓线（直径0.25 mm）法复制FCI/R模型。脑缺血过程中，监测平均动脉血压、心率，并保持直肠温度在36.5℃～37.5℃。icv注射（前囟点后0.8 mm，左旁开1.5 mm，硬膜下3.7 mm）在脑缺血开始前15 min～20 min进行，药物均以人工脑脊液（artificial cerebrospinal fluid, ACSF）作为溶剂，注射总体积为5 μl。实验分为Sham组；I/R组；不同剂量CCK-8（0.3μg、1.0μg、2.0μg、4.0 μg）+I/R 组；Pro（20μg）+I/R组；Pro（20μg） + CCK-8（1.0 μg）+I/R组。各组动物均于脑缺血1 h再灌注24 h,断头取脑，经氯化-2,3,5-三苯基四氮唑（2,3,5-triphenyltetrazolium chloride ,TTC）染色后测脑梗死体积。另外，在Sham、I/R、CCK-8 (1.0μg)+I/R组各取3只大鼠，经升主动脉灌注4% 多聚甲醛固定大脑，进行常规HE染色，光镜观察形态学改变。结果如下：⑴ 脑缺血前、脑缺血20 min或60 min、再灌注20 min各时点的血压和心率变化，组间比较无显著差异 (P>0.05)。icv注射CCK-8后动脉血压仅出现轻微波动，10 min-15 min内恢复至给药前水平。 ⑵ 全脑经TTC染色后，可见非梗死脑组织被染成深红色，缺血梗死的脑组织呈苍白色，梗死区位于缺血半球大脑中动脉（middle cerebral artery, MCA）供血区。从冠状脑片TTC染色可见缺血梗死区主要位于缺血侧纹状体的背外侧及覆盖其上的大脑皮层。I/R组，大脑皮层及纹状体呈大面积的梗死；CCK-8+I/R组，大脑皮层及纹状体的梗死范围均有明显的缩小。⑶冠状脑片经HE染色后光镜下可见，I/R组缺血区大脑皮<WP=7>层呈广泛的液化样坏死，细胞出现空泡样改变，神经细胞大量丢失，残存的细胞胞核固缩深染，核仁模糊或消失，细胞间质染色浅而不均匀。CCK-8（1.0μg）+I/R组脑缺血区存活神经元较多，空泡样改变较轻、发生核固缩的细胞较少，细胞间质染色较均匀。⑷ icv 注射0.3μg～4.0μg 的CCK-8均可缩小FCI/R引起的脑梗死范围，这种作用在CCK-8的剂量为1.0μg (139.30±45.28 mm3)和2.0μg (149.83±42.38 mm3)时最强，与I/R组脑梗死体积(203.93±55.81 mm3)相比分别少31.5%和26.5%( P值均<0.05)。Pro+I/R组梗死体积(255.38±51.78 mm3)显著大于I/R组（P<0.05）；预先注射Pro，可完全阻断CCK-8的神经保护作用。结果表明，中枢给予CCK-8可减轻大鼠FCI/R损伤，这一作用具有剂量相关性，并可被CCK-8的非特异性受体拮抗剂Pro阻断;单纯注射Pro可增加梗死体积。提示内外源性CCK在脑对缺血的耐受性方面起重要作用。然而何