研究目的1)通过采用相对和绝对定量的等量异位标签(isobaric tags for relative and absolute quantitation, iTRAQ)+二维高效液相色谱／串联质谱联用(two-dimensional-liquid chromatography coupled by tandem mass spectrometry,2D-LC-MS/MS)方法标记、检测、鉴定分析精子蛋白质,试图获得较其他研究方法更加全面的精子蛋白质生物学信息；2)通过比较精子蛋白质在正常组以及轻度、中度、重度弱精症组中的动态表达变化,探索精子蛋白质差异表达在弱精子症的作用；3)分析不同程度弱精子症生殖相关精子蛋白的变化情况,探讨涉及生殖过程蛋白质在弱精症中的变化规律。研究内容和方法用iTRAQ)+2D-LC-MS/MS方法研究蛋白质表达变化在成人弱精症中的作用及其可能机制。收集正常精子以及弱精子症精子(分为轻、中、重度),采用iTRAQ方法行蛋白标记,混合样品后用2D-LC-MS/MS行蛋白质组鉴定和差异定量分析。蛋白质表达情况所定量的蛋白通过基因和蛋白分类网站行在线蛋白检索,对所定量蛋白进行功能注释和蛋白分类。研究结果1)本研究收集142例成年男性精液标本,其中正常91例,轻度弱精症22例,中度弱精症18例,重度弱精症11例,四组患者年龄、禁欲时间以及精子形态等无显著差别(P>0.05)。2)共鉴定了1073个蛋白质,显著改变(与正常组比表达上调和下调在两倍或以上)蛋白质数目为511个。包括分子功能相关蛋白、生物过程相关蛋白、细胞成分、蛋白质分类成分以及生物途径蛋白。分子功能蛋白以催化蛋白、结合蛋白和分子结构蛋白为主,生物过程蛋白以代谢过程、细胞过程、免疫反应过程及细胞通讯过程蛋白质为主,细胞成分蛋白质中大部分是细胞内成分,少量胞浆蛋白质。3)轻度、中度、重度弱精症组显著上调和下调表达改变的蛋白质数量分别为108和193、31和282、38和211个,上调和下调表达的蛋白质数量在弱精子症组存在明显差别(P<0.05)。其中,共有104个和10个蛋白在轻、中、重度三组中均呈显著下调和上调表达。4)在1073个蛋白质中,涉及生殖(reproduction, GO:0000003)生物过程的蛋白48个,在轻、中、重度弱精症组呈现不同的变化规律。研究结论1) iTRAQ标记能很好的应用于弱精症精子蛋白质研究,可以获得较2-DE更全面的蛋白质差异表达信息。2)在弱精症中,有数量众多的精子蛋白质表达呈现明显改变,涉及多种分子功能和生物过程。差异表达精子蛋白质在分子功能上主要体现为影响精子的催化、结合和分子结构；在生物过程方面主要体现在代谢过程、细胞过程、免疫反应过程及细胞通讯过程。其表达变化主要以下调表达为主,精子活力的下降可能与相关蛋白质表达降低密切相关。3)涉及生殖过程蛋白质在不同程度弱精症组呈现不同的变化规律。