氟磺胺草醚降解菌株的分离及其在玉米盆栽上的应用研究

来源 :黑龙江八一农垦大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:mybose
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氟磺胺草醚作为主要用于花生和大豆田的除草剂,残效期长,敏感的后茬作物易受严重药害。近年来,由于氟磺胺草醚使用面积的持续增长,其残留问题日益严重,探索短时间内安全有效地解除氟磺胺草醚残留已成为不可回避问题。目前,解决农药残留的主要途径之一便是依靠微生物降解技术,已有许多学者成功分离到了氟磺胺草醚降解菌,证明了微生物降解氟磺胺草醚的可行性。本文旨在获得适用于修复氟磺胺草醚污染土壤的微生物资源,研究其对氟磺胺草醚的降解效果及其在作物栽培与土壤改良中的应用潜力。本试验采用富集培养、倾注分离法从土壤样品中分离到具有氟磺胺草醚降解能力的微生物,利用10 d龄玉米苗地上部分鲜重与土壤中的氟磺氨草醚含量建立了相应的生物检验方法:Y=-7.096x+3.281,R2=0.882,p=0.002≤0.01;通过生物检测与高效液相色谱结合的方法,对分离的降解菌株进行了降解能力检测,确定FCX2菌株与FCX7菌株均具有较强的降解效果,当以500 mg·L-1的氟磺胺草醚为唯一碳源,30℃,150 r·min-1培养5 d后,高效液相色谱法检测降解率分别可达44.86%和50.79%。经生理生化指标鉴定和16S rDNA测序鉴定,FCX2菌株与FCX7菌株分别为产碱菌属菌株(Alcaligenes sp.)和芽孢杆菌属菌株(Bacillus sp.)。FCX2菌株生长特性试验表明:最适温度30℃,最适pH 6,最适碳源为葡萄糖,最适氮源为蛋白胨;FCX2菌株生长培养基优化试验结果表明(g·L-1):葡萄糖22.16,蛋白胨26.14,K2HPO4 1.76,KH2PO4 0.59,微量元素调整为原浓度的1.78倍,FCX2菌株在此条件下培养40 h后OD600最大值可达1.52,与优化预测结果相似。FCX7菌株生长特性试验表明:最适温度30℃,最适pH 6,最适碳源为市售白糖,最适氮源为酵母膏;FCX7菌株生长培养基优化试验结果表明(g·L-1):市售白糖22.75,酵母膏27.95,K2HPO4 1.09,KH2PO4 0.36,微量元素为原浓度的2.02倍,FCX7菌株在此条件下培养52 h后OD600最大值可达2.64,与优化预测结果相似。为了明确菌株的应用潜力,进行了发酵液对种子萌发影响试验。试验中发现:FCX2菌株与FCX7菌株均有显著促进玉米种子萌发的能力,鉴于FCX2菌株发酵液pH较高,故仅测定了FCX7菌株发酵液在种子萌发中对MDA含量和抗逆酶活性的影响,结果表明FCX7菌株发酵液稀释40倍后与相同稀释倍的培养基相比,SOD(超氧化物歧化酶)活性、POD(过氧化物酶)活性、CAT(过氧化氢酶)活性分别高出了4.53%,10.74%和14.09%,MDA(丙二醛)含量降低了23.60%,说明了FCX7菌株对玉米种子萌发有一定促进作用。盆栽试验结果表明,当土壤中初始氟磺胺草醚浓度达0.30 mg·kg-1时,施用1×1010cfu·kg-1浓度的FCX7菌株降解21 d后,高效液相色谱法检测其降解率达到62.33%,生物检测降解率达44.82%;与未添加菌降解的处理相比,玉米苗的地上部分鲜重高出了39.89%,MDA含量下降了45.63%,CAT、POD和SOD活性分别提高了47.64%、107.35%和51.12%;玉米苗地下部分MDA含量下降了10.21%,SOD、CAT和POD活性分别提了41.73%、34.97%和25.91%;土壤脲酶、蛋白酶、CAT和POD活性分别提高了5.83%、16.21%、28.69%和10.16%,表明FCX7菌株对氟磺胺草醚污染土壤有较强的修复作用。而仅添加1×1010cfu·kg-1浓度FCX7菌株处理比不加菌的土壤处理的地上部分鲜重提高了3.38%,土壤脲酶、蛋白酶、CAT、POD活性分别增加了10.15%、6.88%、8.1%、8.82%;玉米苗地上部分MDA下降了10.21%,而SOD、CAT、POD分别增加了7.33%、18.58%和13.92%;玉米地下部分MDA下降了15.54%,而SOD、CAT、POD分别增加了6.77%、5.15%和14.11%,表明施用FCX7菌株对玉米生长有明显的改善作用。通过本试验,证实了Alcaligenes sp.FCX2菌株和Bacillus sp.FCX7菌株对氟磺胺草醚降解能力,阐明了菌体生长特性及降解特性。通过盆栽进一步明确了FCX7菌株在土壤降解能力对玉米苗生长的影响。此结果获得为改良氟磺胺草醚污染土壤的研究与应用提供了一定的理论依据、技术支持和相应的微生物资源。
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