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背景Th1和Th2是CD4+T细胞的两个功能亚群，起源于同一前体—Th0细胞，正常情况下二者处于平衡状态。Th1/Th2平衡紊乱是许多疾病的免疫学基础，其中，Th2优势状态与过敏性疾病的发生密切相关。许多因素参与Th1/Th2的分化调节，其中最重要的体内因素是细胞因子（如IL-4、IFN-γ、IL-12）和抗原提呈细胞；而最重要的体外因素则是抗原，如花粉、尘螨抗原等过敏原，和哮喘的发生有着直接关系。研究发现，分枝杆菌可以调节Th1和Th2平衡，例如，牡牛分枝杆菌的应用降低了过敏原致敏小鼠Th2型细胞因子水平；雾化吸入BCG或其他分枝杆菌，可刺激小鼠肺泡Mφ释放IL-12、IFN-γ和IFN-β等Th1型细胞因子。这些结果说明，分枝杆菌可以作为调节机体免疫应答模式的工具。耻垢分枝杆菌（Mycobacterium Smegmatis, M.S）由于其快速的繁殖力，高效的转化率以及无致病性等优点已经逐渐被认为是一种理想疫苗。相关研究表明，M.S具有良好的免疫原性，它能够抑制Th2型免疫反应，同时提升Th1型免疫应答。我们前期构建的Der p2重组耻垢分枝杆菌（pCW-Derp2-rM.S），通过动物实验也证实了其可以逆转Th2优势免疫反应，但是pCW-Derp2-rM.S相对于肠道来说是外来细菌，由于和肠道的亲和力不高从而影响了免疫效果，所以我们本次研究的目的主要是探索抗生素预处理之后口服pCW-Derp2-rM.S是否能够提高免疫效果。目的1．探索抗生素预处理前后肠道对口服疫苗M.S及pCW-Der p2-rM.S的影响。2.比较抗生素预处理前后分别口服免疫M.S及pCW-Der p2-rM.S，小鼠血清中各细胞因子及抗体的变化。3．探索抗生素预处理后前后口服M.S及pCW-Der p2-rM.S对小鼠脾脏淋巴细胞中各细胞因子和T细胞亚群的影响。实验方法和结果1．相关淋巴样组织（GALT）中细菌计数不同抗生素预处理后分别给予小鼠口服免疫M.S及pCW-Der p2-rM.S，在末次免疫后第2、14、28和56天脱颈处死小鼠，无菌收集肠道GALT后匀浆并涂布于7H10培养基上培养并计数。结果显示，抗生素预处理后，M.S/pCW-Derp2-rM.S经口服可以在GALT中以活菌的状态存留，数量在第14天达到高峰(P<0.05)，随后逐渐减少，和生理盐水组对比有明显统计学差异(P<0.05)。pCW-Der p2-rM.S组与M.S组间无统计学差异(P>0.05)，三种抗生素之间无统计学差异(P>0.05)。2．抗生素预处理口服M.S及pCW-Der p2-rM.S对BALB/c小鼠血清中细胞因子及抗体的影响抗生素预处理小鼠后分别口服接种两种不同疫苗，在末次免疫后第2、4、8、10周分别用ELISA检测小鼠外周血中细胞因子IFN-γ、IL-4水平及抗体IgG1、IgG2a的水平。结果显示：生理盐水或抗生素溶液预处理小鼠后，接种M.S/pCW-Der p2-rM.S与接种甘油相比其血清中IFN-γ、IgG2a/IgG1水平随着时间的延长逐渐升高，IL-4水平随着时间的延长而降低，其中IFN-γ、IL-4在末次免疫后第8周变化明显，IgG2a/IgG1在末次免疫后第4、8周变化明显，pCW-Derp2-rM.S组高于M.S组(P<0.05)；抗生素预处理与生理盐水处理后相比，口服甘油后IFN-γ、IgG2a/IgG1水平降低，IL-4水平升高，但接种M.S/pCW-Der p2-rM.S后可提升IFN-γ和IgG2a/IgG1水平，降低IL-4水平，且抗生素预处理后口服M.S/pCW-Der p2-rM.S与生理盐水预处理组相比有统计学差异（P<0.05）。3．抗生素预处理口服M.S及pCW-Der p2-rM.S对BALB/c对小鼠脾脏淋巴细胞中各细胞因子和T细胞亚群的影响抗生素预处理小鼠后分别口服接种两种不同疫苗，在末次免疫后第2、4、8、10周分别用ELISA、ELIPOT及流式细胞术(FCM)检测小鼠脾脏中各细胞因子和T细胞亚群。结果显示：口服接种pCW-Der p2-rM.S与M.S后第8周，免疫小鼠脾脏淋巴细胞中Th1型细胞因子IFN-γ高于Th2型细胞因子IL-4，且pCW-Derp2-rM.S与M.S相比有统计学差异（P<0.05）；口服抗生素后IL-4升高IFN-γ下降，而接种疫苗后免疫小鼠脾脏淋巴细胞中分泌IFN-γ明显升高，IL-4明显降低，与生理盐水预处理后相比有统计学差异（P<0.05）。结论1．肠道对口服疫苗M.S及pCW-Der p2-rM.S未有明显影响，抗生素预处理后可以提高口服M.S及pCW-Der p2-rM.S和肠道的粘附能力。2．抗生素预处理后口服接种M.S及pCW-Der p2-rM.S能显著提高小鼠血清中Th1型细胞因子IFN-γ及抗体IgG2a及IgG1水平。3．与生理盐水预处理后相比，抗生素预处理后口服M.S及pCW-Der p2-rM.S更有助于刺激小鼠脾脏淋巴细胞中Th1型细胞分化。