【摘 要】
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G0/G1转换的研究日益受到关注,但对其机制还知之甚少.我们用血清饥饿法获得人胚肾(293)细胞G0期和G1不同时期(细胞进入G1期1、3和5小时)的同步化细胞,分别从基因水平和蛋白水
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G0/G1转换的研究日益受到关注,但对其机制还知之甚少.我们用血清饥饿法获得人胚肾(293)细胞G0期和G1不同时期(细胞进入G1期1、3和5小时)的同步化细胞,分别从基因水平和蛋白水平上检测G0和G1期细胞的差异,探讨G0/G1转换的分子机理.在利用DNA Array技术检测了G0期和G1期293细胞的基因表达差异的工作基础上,我们又通过摸索建立的一套较为成熟而可靠的SELDI芯片技术平台检测了293细胞G0,G1-1h,G1-3h和G1-5h四组细胞的蛋白表达差异.首先选用阴离子交换柱处理四组细胞的总蛋白,用六种不同的洗脱液洗脱柱床,通过改变洗脱液的PH值将每个样品分为6个具有不同PI的蛋白组分.然后将每个组分分别用WCX2,IMAC3-Cu和H4三种芯片检测.最后采用美国Ciphergen生物公司研制的蛋白芯片阅读机读取数据,获得的蛋白质谱采用Ciphergen公司的Proteinchip Software3.0软件分析.结果得到86种差异蛋白.其中,54种蛋白是在G0到G1转换中表达上调的蛋白,而其余则是在此过程中表达量下降的蛋白.有7种蛋白可被一种以上的芯片检测到.
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