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枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis在生长代谢过程中能够产生不同种类的抗菌物质,包括非核糖体合成的脂肽类抗生素(lipopeptide antibiotics)和核糖体合成的细菌素(bacteriocin)以及Bacillus subtilis抗菌蛋白。芽孢杆菌属的细菌能够产生多种脂肽类抗菌物质,包括表面活性素、伊枯草菌素和芬荠素三大类,具有抗细菌、真菌、病毒和支原体的功能,在生物医药方面具有重要的应用价值。此外,脂肽作为一种生物表面活性剂在石油工业、食品、化妆品和农业上有着广泛的应用价值。然而,较高的生产和回收成本限制了脂肽的工业化生产,因此寻找能够提高脂肽产量、降低生产和回收成本的方法是目前迫切需要解决的问题。本研究的目的在于,对本实验室保藏的两株产抗菌脂肽的枯草芽孢杆菌,通过灭活原生质体融合的手段选育抗菌脂肽高产菌株,提高脂肽产量。本研究主要内容包括以下几个方面：1.研究了双亲菌株的培养条件,绘制了培养条件下的生长曲线,确定了最佳的培养条件：将菌株接到斜面培养基活化24h,挑一环接至液体培养基,37℃,180rpm,摇床培养14h,再按5%的接种量接至50mL菌体收集培养中,培养4-5h后收集。在确定了菌体培养条件基础上,对原生质体制备与再生条件作了研究。fmbJ采用0.1mg／mL溶菌酶,在37℃下处理20min即可获得98.3%的原生质体,并且回复率达到10.6%；fmbR则采用37℃,1mg／mL处理40min后,破壁率达到了94.7%,回复率达到了14.0%。2.分别对fmbJ、fmbR进行热灭活、紫外灭活,对灭活条件进行研究。并对两菌的灭活原生质体进行融合实验,并研究其融合条件,最终确定为：fmbJ采用热灭活20min；fmbR采用紫外灭活60min。灭活后的原生质体在40%PEG6000,在pH9.0下,37℃水浴10min,融合率达到6.97×10-7。3.取134株融合后菌株发酵筛选,将优良融合子传代10代,发酵后通过抑菌实验及高效液相色谱(HPLC)检测其产抗菌肽能力。最终得到一株融合子F22,发酵抗菌脂肽粗提物对大肠杆菌、藤黄微球菌、荧光假单孢菌较亲本菌株有明显提高,经高效液相色谱分析,F22较fmbJ, surfactin物质提高了约1.75倍,而Fengycin的两组分则分别提高了40%和26%。4.利用AFLP技术对融合子与双亲菌株的基因组DNA进行比较,电泳结果表明融合子F22与亲本菌株存在显著差异,从而在分子水平上进一步验证F22为融合子。