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胃癌是最常见的恶性肿瘤之一,是全世界癌症相关死亡的第三大原因。胃癌患者的5年生存率仍然很低。研究表明,肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)在恶性肿瘤发生发展中起重要作用。肿瘤干细胞是肿瘤细胞的祖细胞,具有类似于成体干细胞的自我更新能力和多分化潜能,对肿瘤发生、维持肿瘤内稳态并使肿瘤的侵袭性增高进而出现转移起决定性作用。近年来,用CSCs理论来解释肿瘤的复发、转移受到科学家们的广泛认可,因此,在肿瘤治疗过程中清除CSCs非常重要。星形细胞上调基因-1(Astrocyte elevated gene-1,AEG-1),也被称为异粘蛋白(Metadherin,MTDH),首次在感染HIV的原代人星形胶质细胞中被鉴定。近年来,大量研究支持AEG-1/MTDH在癌症发展中扮演着重要的角色,其在肿瘤的转化、凋亡逃避、侵袭、血管生成及转移等多个方面发挥关键作用,与肿瘤的进展和临床不良预后相关。然而,AEG-1在人胃癌干细胞致瘤性中的作用仍不清楚。目的:(一)探讨AEG-1在胃癌细胞HGC-27、MKN-45中的表达情况,为进一步研究其在胃癌干细胞中的功能奠定基础。(二)观察AEG-1在胃癌HGC-27、MKN-45干细胞增殖、凋亡和干性方面的变化,探讨AEG-1基因在胃癌干细胞中的功能。方法:(一)通过流式细胞仪分选胃癌干细胞,并通过无血清成球实验及裸鼠体内成瘤实验验证所分选得到的为肿瘤干细胞。(二)通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western blot检测胃癌干细胞(HGC-27、MKN-45)及相应非干细胞mRNA及蛋白表达水平。(三)采用瞬时转染法对AEG-1进行处理,使用MTS、细胞周期检测细胞增殖情况及作用机制,Annexin V及Caspase 3/7活性检测细胞凋亡情况。(四)通过干细胞成球试验评估AEG-1沉默对胃癌干细胞干性的影响以及裸鼠体内成瘤试验评估AEG-1对裸鼠体内胃癌干细胞肿瘤发生的影响。结果:(一)经过流式分选出潜在胃癌干细胞;无血清成球和裸鼠成瘤的试验结果证明分选到的细胞为胃癌干细胞。(二)实时荧光定量技术(qRT-PCR)及Western blot结果显示,胃癌干细胞中AEG-1表达水平高于非干细胞组。(三)MTS试验结果显示,转染AEG-1-siRNA的胃癌干细胞增殖明显减少,而AEG-1敲低后对胃癌非干细胞的生长没有显著影响。AEG-1沉默可导致胃癌干细胞周期停滞在G1期。Annexin V及Caspase 3/7活性检测AEG-1敲低可诱导胃干细胞凋亡。(四)成球实验结果显示AEG-1表达被敲低时显著抑制了胃癌干细胞的成球能力;裸鼠体内成瘤实验表明AEG-1缺失抑制了肿瘤干细胞的体内成瘤能力。结论:1.从胃癌HGC-27、MKN-45细胞系成功分选出胃癌干细胞并在胃癌细胞系中敲低AEG-1基因表达。2.AEG-1基因沉默后抑制胃癌干细胞增殖和促进胃癌干细胞凋亡,提示AEG-1基因影响胃癌干细胞增殖能力和凋亡。3.AEG-1基因沉默后抑制胃癌干细胞成球能力、抑制裸鼠体内成瘤能力,提示AEG-1基因对胃癌干细胞干性产生影响。