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目的：观察促红细胞生成素(erythropoietin, EPO)对实验性变态反应性脑脊髓炎(Experimental Autoimmune Encephalomyelitis, EAE)小鼠模型治疗效果。方法：将EAE小鼠随机分为PBS对照组(EAEcontrol)、预防性EPO干预组(EPOpremorbid)以及治疗性EPO干预组(EPOpostmorbid),观察EAE临床症状和体重变化；HE染色观察脊髓炎性细胞浸润,应用流式细胞仪观察脑和脊髓细胞亚群以及相关细胞因子。结果：同EAEcontrol相比,EPOpremorbid和EPOpostmorbid组小鼠起病时间较晚,临床症状较轻,腰骶部脊髓浸润细胞较少(P<0.05)；EPOpremorbid浸润细胞中CD4+T细胞、IL-17+CD4+T细胞以及IFN-γ+CD4+T细胞比例均显著低于EAEcontrol(P<0.05)。结论：EPO可改善EAE小鼠临床症状,减少病灶浸润炎性细胞以及炎性因子。目的：观察EPO受体在外周免疫细胞和中枢胶质细胞上的表达。方法：从EAE脾脏和外周淋巴结中提取单个核细胞,并进一步纯化提取CD4+T细胞；培养并鉴定原代星型胶质细胞和小胶质细胞；应用RT-PCR观察EPO受体的表达。结果：在外周,EPO受体可表达在单个核细胞,但不表达在CD4+T细胞；在中枢,EPO受体均可表达在静息态和LPS激活态的星形胶质细胞和小胶质细胞。结论：EPO受体在外周免疫细胞和中枢胶质细胞上均有表达。目的：探讨EPO是否可通过对外周免疫细胞的作用而实现对炎性细胞功能的抑制。方法：应用流式细胞仪观察,EAEcontrol和EPOpremorbid组外周单个核细胞(Mononuclear cells, MNC和MNCe)亚群以及MHC-Ⅱ和细胞因子表达；植物血球凝集素(PHA)或MOG35-55抗原刺激外周免疫细胞后,MTT法观察细胞增殖,同时应用ELISA和RT-PCR观察细胞因子变化。结果：MNCe中CD4+T细胞、IL-17+CD4+T细胞和(或)IFN-γ+CD4+T细胞、MHC-Ⅱ比例均显著低于MNC(P<0.05)；PHA非特异性刺激后,MNCe的IL-17、IL-23、IL-6和IFN-γ低于MNC(P<0.05),而两者的增殖率无显著差异(P>0.05)；EPO和MOG35-55抗原共同处理后MNC所产生的IL-17、IFN-γ、IL-23低于单独用MOG35-55抗原刺激后MNC(P<0.05)；EPO和MOG35-55抗原共同处理后CD4+T细胞所产生的IFN-γ低于单独用MOG35-55抗原刺激后CD4+T细胞(P<0.01)。结论：EPO可以抑制外周单个核细胞IL-17和IFN-γ等炎性因子分泌,其机制可能同下调IL-23和MHC-Ⅱ水平有关。第四部分EPO对星形胶质细胞与EAE免疫细胞相互作用的影响目的：探讨EPO可否通过对星形胶质细胞作用,影响它们同EAE小鼠外周免疫细胞的相互作用。方法：EPO处理静息态和LPS/IFN-γ激活态星形胶质细胞后,应用ELISA和RT-PCR等方法,观察细胞因子变化；MTT法观察星形胶质细胞增殖；利用细胞免疫化学和流式细胞仪,观察MHC-Ⅱ表达水平的差异。EPO处理前后,静息态和LPS/IFN-γ激活态星形胶质细胞,分别以1：1或1：5比例同MNC和CD4+T细胞共培养,应用ELISA观察细胞因子分泌,流式细胞仪观察MHC-Ⅱ表达。结果：1)EPO抑制静息态星形胶质细胞IL-6和LPS激活态星形胶质细胞IFN-γ、IL-6、IL-17、IL-23以及MHC-Ⅱ表达(P<0.05)；2)EPO可促星形胶质细胞增殖以及一氧化氮(nitric oxide,NO)释放；3)静息态星形胶质细胞经EPO处理后,可使其与MNC以1：1比例共培养中IFN-γ、IL-10和IL-6降低(P<0.05),与MNC以1：5比例共培养中IL-6、IFN-γ、IL-17以及IL-23降低(P<0.05)；4)激活态星形胶质细胞经EPO处理后,可使其与CD4+T细胞以1：1比例共培养中IL-6、IFN-γ、IL-17和IL-23降低(P<0.05)。结论：EPO促进静息星形胶质细胞增殖和NO释放,抑制LPS/IFN-γ激活态星形胶质细胞MHC-Ⅱ以及IL-17、IL-23和IL-27表达。EPO预处理的星形胶质细胞可在与免疫细胞共培养中抑制IL-17或(和)IFN-γ,其机制可能同下调MHC-Ⅱ和(或)IL-23等有关。第五部分EPO对小胶质细胞与EAE免疫细胞相互作用的影响目的：探讨EPO可否通过对小胶质细胞作用,影响它们同EAE小鼠免疫细胞的相互作用。方法：EPO处理静息态和LPS/IFN-γ激活态小胶质细胞后,应用ELISA和RT-PCR等方法,观察细胞因子变化；LDH测定观察小胶质细胞死亡；利用细胞免疫化学和流式细胞仪,观察MHC-Ⅱ表达水平的差异。EPO处理前后,静息态和LPS/IFN-γ激活态小胶质细胞,分别以1：1或1：5比例同MNC和CD4+T细胞共培养,应用ELISA观察细胞因子分泌,流式细胞仪观察MHC-Ⅱ表达。结果：1)EPO抑制激活态小胶质细胞IFN-γ、IL-6、IL-17、IL-23以及MHC-Ⅱ表达(P<0.05)；2)EPO可抑制小胶质细胞死亡；3)静息态星形胶质细胞经EPO处理后,可使其与CD4+T细胞以1：1比例共培养中IL-6、IL-17、IL-23降低(P<0.05),与CD4+T细胞以1：5比例共培养中IL-6、IFN-γ、IL-23降低(P<0.05),与MNC以1：1比例共培养中IFN-γ降低,IL-10升高(P<0.05)；4)激活态小胶质细胞经EPO处理后,可使其与CD4+T细胞以1：1比例共培养中IL-6、IFN-γ、IL-23降低(P<0.05),与MNC以1：1比例共培养中IL-6、IFN-γ降低(P<0.05)；5)与MNC共培养的静息态小胶质细胞,MHC-Ⅱ表达上调(P<0.05),若小胶质细胞经EPO预处理,则MHC-Ⅱ表达可被抑制(P<0.05)。结论：EPO抑制静息态小胶质细胞死亡,抑制LPS/IFN-γ激活态小胶质细胞MHC-Ⅱ表达以及IL-17、IL-23、IL-27产生。EPO对静息或激活态小胶质细胞的预处理,使得其与免疫细胞共培养中IL-17和(或)IFN-γ降低,其机制可能同下调IL-23和MHC-Ⅱ表达有关。1.EPO可减轻EAE病灶炎性细胞浸润,改善临床症状。2.外周单个核细胞和中枢胶质细胞上均有EPO受体表达,EPO可直接作用于这些细胞,但CD4+T细胞并不表达EPO受体。3.激活态星形胶质细胞和小胶质细胞可表达MHC-Ⅱ,同时有IL-17、IL-23和IL-27产生,而EPO则可抑制这些功能分子的表达。4.EPO可促星形胶质细胞增殖和NO释放。5.脾脏以及外周淋巴结组织中的单个核细胞是EAE主要的免疫效应细胞,EPO可以抑制外周单个核细胞IL-17、IFN-γ等炎性因子产生。6.与未经EPO处理的胶质细胞相比,EPO预处理的静息态以及激活态星形胶质细胞或小胶质细胞,可在与免疫细胞共培养中抑制IL-17或(和)IFN-γ,其机制可能同下调IL-23或(和)MHC-Ⅱ等有关。