肝细胞移植治疗放射性肝损伤的实验研究

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目的 研究移植肝细胞在放射性肝损伤动物模型体内的代谢支持作用,评价肝细胞移植对放射性诱导的肝病(RILD)的治疗效果。 方法 以~60Co作为放射源照射实验大鼠肝区,总剂量40Gy,一次性照射,剂量率为100cG/min,制成急性放射性肝损伤动物模型。4天后将所有照射动物施行部分肝叶切除术(约占2/3)。以改良两步法分离同种属大鼠肝细胞:第一步,以无钙、镁PBS液灌注肝脏,去除钙离子和镁离子;第二步,以0.05%胶原酶液灌注至肝脏呈苍白色,过滤、离心后制成肝细胞悬液。用胎盼兰鉴定肝细胞活力,调整细胞浓度至5.0×10~6/ml。并立即将上述动物随机分为两组,实验组行经脾脏实质的肝细胞移植,移植细胞数为5.0×10~6,对照组经脾实质注射等量生理盐水。术后1月两组分别采血测血清清蛋白水平。术后2月再次检测清蛋白,并作常规病理切片及透射电镜检查,比较两组在组织结构上的差异。动态观察两组生存率的变化。 结果 肝细胞移植术后1月,实验组血清清蛋白水平明显上升,和对照组相比有显著差异。移植后2月,实验组血清清蛋白水平进一步升高,与对照组、本组1月前的水平均有显著差异。表明移植后实验组的清蛋白呈动态上升过程。移植后1月和2月两组动物死亡率的差异均有统计学意义。组织学检查示实验组放射性肝损伤轻于对照组。 结论 采用改良的两步胶原酶灌注法分离肝细胞,其分离效果良好。同种肝细胞经脾脏移植后,在放射性肝损伤动物模型体内有良好的代谢支持作用,并可提高其短期生存率。
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