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第一部分MACC1与非小细胞肺癌浸润性及淋巴结转移的关系研究目的评估NSCLC患者MACC1表达的不同等级水平对NSCLC浸润性和淋巴结转移的预测价值。方法分别以NSCLC患者中浸润性癌或有淋巴结转移者为病例组,以非浸润性癌或无淋巴结转移者为对照组,根据对照组MACC1 mRNA相对表达量的四分位数(Q1、Q2和Q3)将对照组和病例组MACC1 mRNA的表达水平划分为4个等级(分别为等级1:≤Q1,等级2:>Q1且≤Q2,等级3:>Q2且≤Q3和等级4:>Q3),通过多因素分析(二项分类Logistic回归模型)控制混杂因素,明确MACC1表达的不同等级水平与NSCLC侵袭性和淋巴结转移的优势比(odds ratio,OR),并通过接收者工作特征曲线(receiver operating characteristics curve,ROC曲线)和诊断试验(Diagnostic Test)评估MACC1表达的不同等级水平预测NSCLC浸润性和淋巴结转移的价值。结果MACC1 mRNA的相对表达量>Q2(17.32)是NSCLC为浸润性癌的独立危险因素,其相对表达量的等级3[>Q2(17.32)且≤Q3(37.49)]和等级4[>Q3(37.49)]的调整OR值分别为4.049和23.598,且以MACC1 mRNA的相对表达量>Q3(37.49)为标准预测NSCLC浸润性的价值可达中等;MACC1 mRNA的相对表达量>Q2(16.23)是NSCLC有淋巴结转移的独立危险因素,其相对表达量的等级3[>Q2(16.23)且≤Q3(35.37)]和等级 4[>Q3(35.37)]的调整 OR 值分别为 3.904 和 18.159,以 MACC1 mRNA的相对表达量>Q3(35.37)为标准预测NSCLC淋巴结转移的价值可达中等。结论MACC1 mRNA的相对表达量为NSCLC浸润性癌和有淋巴结转移的的独立危险因素,具有一定的预测价值。第二部分 嵌合抗MACC1抗体沉默MACC1对非小细胞肺癌生物学行为影响目的构建嵌合抗MACC1抗体,并评估其活性及对NSCLC细胞增殖和侵袭能力的抑制效果。方法构建嵌合抗MACC1抗体,通过MTT分析观察其对NSCLC细胞增殖的影响,通过Transwell小室侵袭实验观察其对NSCLC细胞侵袭能力的影响,通过RT-qPCR和Western blot分析其可能的机制。结果嵌合抗MACC1抗体可以显著抑制NSCLC细胞的增殖和侵袭;经过嵌合抗MACC1 抗体处理的 NSCLC 细胞中 HGF、c-Met、Vimentin、E-cadherin、Slug、MMP-1、CT-I和Fibronectin蛋白的相对表达水平均显著低于未经过嵌合抗MACC1抗体处理的NSCLC细胞。结论嵌合抗MACC1抗体可以抑制NSCLC的增殖和侵袭,其机制可能是通过调节HGF/c-Met信号通路抑制EMT过程的发生,同时抑制侵袭转移相关蛋白的表达,从而发挥抑制肿瘤侵袭和转移的作用第三部分 嵌合抗MACC1抗体对小鼠非小细胞肺癌移植瘤的治疗效果研究目的将嵌合抗MACC1抗体应用小鼠NSCLC皮下移植瘤模型,进一步研究其对NSCLC细胞增殖及淋巴结转移的作用。方法建立小鼠NSCLC皮下移植瘤模型,并将其随机分成实验组和对照组。实验组小鼠给予静脉注射100μg的嵌合抗MACC1抗体进行治疗,持续14天,每天1次;对照组则注射相同的体积的PBS缓冲液。分别记录两组在治疗后0天(即接种后第6天)、第3天、第6天、第9天、第12天、第15天、第18天、第21天和第24天的肿瘤体积。分别记录两组在治疗开始后至150天的存活情况。治疗开始后150天后处死小鼠,取得移植瘤及淋巴结标本。分别记录两组淋巴结转移率和肿瘤组织中MACC1蛋白的表达水平。结果嵌合抗MACC1抗体可以显著减小皮下移植瘤小鼠肿瘤的体积,提高皮下移植瘤小鼠的存活率,抑制皮下移植瘤小鼠淋巴结转移的发生。结论在动物实验研究中,嵌合抗MACC1抗体可以显著减小皮下移植瘤小鼠肿瘤的体积,提高皮下移植瘤小鼠的存活率,抑制皮下移植瘤小鼠淋巴结转移的发生。