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人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(human granuloeytc-macrophage colonystimulating factor，hGM-CSF)作为一种重要的具有免疫调节功能的糖蛋白，在当前具有重要的临床应用价值。如何获得高效表达、高活性、毒副作用小的hGM-CSF是近年来基因工程研究的热点。目前重组hGM-CSF已在多种表达系统中表达，随着重组hGM-CSF的临床研究的日趋成熟，其应用前景将更为广阔。
家蚕转基因的研究已经有20多年的历史了，具有家蚕杆状病毒表达系统无可比拟的优势。但是，外源基因的有效导入、整合表达水平及遗传稳定性上还存在很多不足。本研究将带有以家蚕丝素重链基因第一外显子及其下游部分序列和第二外显子部分序列及其上游部分序列做为同源序列和A3启动子控制下的gfp报告基因以及由丝素轻链(fib-L）启动子控制下的hGM-CSF基因的打靶载体利用精子介导法导入家蚕，通过绿色荧光和分子生物学方法筛选转基因家蚕，首次利用基因打靶技术成功获得可以正常结茧传代的转基因家蚕，ELISA检测结果显示，hGM-CSF在每克鲜组织中的表达量为1.26 ng。同时，成功构建了具有hGM-CSF表达元件的昆虫细胞转化载体PIZT-hGM-CSF，转基因载体与辅助质粒分别共转染家蚕BmN细胞和昆虫Sf-9细胞，利用博莱霉素筛选获得持续表达hGM-CSF稳定转化细胞系，ELISA检测结果显示，hGM-CSF在106个稳定转化的家蚕BmN细胞和昆虫Sf-9细胞中的表达量分别为0.7ng和0.3 ng;利用精子介导法将转基因载体导入家蚕，通过绿色荧光和分子生物学方法筛选转基因家蚕，western blot结果显示，转基因家蚕丝腺表达的hGM-CSF的分子量为22 kD。ELISA检测结果显示，每克鲜组织中hGM-CSF表达量为4.7ng。证明昆虫表达载体pIZT/V5- His可以直接应用于转基因家蚕研究。