西瓜黄皮突变体果皮色泽相关的SSHcDNA文库的构建及相关基因初步筛选

来源 :江西农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhelehang
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西瓜是当今我国重要的经济作物之一,已逐步成为我国具有较大经济增长空间,并且拥有强大的竞争力的重要园艺作物[1]。西瓜的品质包括营养、风味及外观的品质,其中,外观的品质又包括大小、皮色、果实形状等等。以前,果皮的图案和颜色大家都不太重视,对这方面的要求不高,但是,随着消费市场和人们需求的改观,不同皮色西瓜的育种成为了西瓜育种的目标之一。当今社会,西瓜的果皮颜色成为最重要的商品特性之一,所以,西瓜的质量、产量以及外观对于提高西瓜的商品质量与品种结构都有很重要的意义。本研究对象是西瓜黄皮突变型、绿皮野生型两种材料。其中以黄色果皮为实验组(tester),绿色果皮作为对照组(driver),运用抑制消减杂交技术(SSH),获得正向差异表达的cDNA,并且构建西瓜果实成熟期果皮色泽相关的SSH cDNA文库。从文库中挑选110个克隆进行测序,验证文库构建质量。本研究取得的主要结果如下:1.构建SSH-cDNA文库、Nothern杂交分析、进行PT-PCR的前提就是从植物组织中要提取出搞质量的总RNA。在SSH的实验过程中,高质量的RNA是能否获得完整的、长片段cDNA的前提,也是关键。本研究利用Plant RNAzol提取总RNA,并且质量较好,28S:18S接近2:1,没有DNA污染。2.利用抑制消减杂交技术成功构建SSH cDNA文库,克隆转化后通过菌液PCR扩增,选择cDNA插入片段在200~1000bp,说明转化率高,PCR特异性较好。3.从文库中挑选110个序列进行测序,得到了104条合格的EST序列,同源序列中91条序列与已知功能基因有同源性。这91条序列在ncbi的nr数据库进行blastn分析,大多数是编码酪氨酸激酶、虫漆酶、ATP合成酶、脂肪酸酰安水解酶、过氧化物酶、琥珀酸精氨酸合成酶、泛素结合酶、周期依赖性蛋白激酶、纤维素合成酶、半乳糖甘转移酶、溶酶体β葡糖苷酶、咖啡酸3-O-甲基转移酶、植物生长素受体因子、酸性磷酸酶等,这为研究西瓜果皮色泽相关的基因差异表达奠定了基础。
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