【摘 要】
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目的:为了提高阿霉素（DOX）对肿瘤细胞的靶向作用以及抑制作用,并降低DOX的毒副作用,构建一种新型的载DOX聚乙二醇化磷脂胶束制剂,对其进行质量评价,并初步考察其体外抗肿瘤效率及相关细胞作用机制。方法:1、采用薄膜分散法制备载DOX聚乙二醇化磷脂胶束制剂（DOX-DPM、DOX-VDPM1、DOX-VDPM2）及相应空白载体胶束制剂（DPM、VDPM1、VDPM2）,并通过粒子形貌、粒径、zet
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目的:为了提高阿霉素（DOX）对肿瘤细胞的靶向作用以及抑制作用,并降低DOX的毒副作用,构建一种新型的载DOX聚乙二醇化磷脂胶束制剂,对其进行质量评价,并初步考察其体外抗肿瘤效率及相关细胞作用机制。方法:1、采用薄膜分散法制备载DOX聚乙二醇化磷脂胶束制剂（DOX-DPM、DOX-VDPM1、DOX-VDPM2）及相应空白载体胶束制剂（DPM、VDPM1、VDPM2）,并通过粒子形貌、粒径、zeta电位和包封率对载药胶束制剂进行表征。透析法考察不同p H条件下载药胶束制剂的体外释药情况,并于各时间点取样,采用紫外可见分光光度法来检测各时间点的药物浓度,从而计算出各组的累计释放度。2、选取小鼠乳腺癌4T1、人乳腺癌MDA-MB-231以及人正常肝L02细胞,分别给予不同浓度的DPM、VDPM1和VDPM2,采用MTT法检测上述三种空白载体制剂对细胞的生长抑制情况。3、载药胶束体外抗肿瘤活性的考察。选取4T1、MDA-MB-231细胞,分别给予不同浓度的DOX-DPM、DOX-VDPM1、DOX-VDPM2和DOX溶液,采用MTT法检测上述四种制剂对肿瘤细胞的生长抑制情况。4.载药胶束的细胞摄取及胞内分布。通过流式细胞仪对载药胶束制剂的细胞摄取进行定量考察,采用激光共聚焦显微镜对载药胶束在4T1细胞内的分布定位情况进行定性考察。5、胶束抗肿瘤作用机制考察。选择活性氧试剂盒以及钙离子试剂盒,选取4T1、MDA-MB-231以及L02细胞,加入空白载体（DPM、VDPM1、VDPM2、VES）,对照组为空白培养液处理的细胞,通过流式细胞仪检测各组活性氧及钙离子含量变化。结果:1、制备的载药胶束DOX-DPM的包封率为98.09%,,粒径为25.31 nm,zeta电位为-3.12 m V;DOX-VDPM1的包封率为98.02%,,粒径为23.54 nm,zeta电位为-1.74 m V;DOX-VDPM2的包封率为98.05%,,粒径为30.06 nm,zeta电位为-4.11 m V。体外释放实验结果表明,随着p H的降低,载药胶束的释放度增高。2、MTT法检测空白载体的细胞毒性。对于4T1、MDA-MB-231这两种肿瘤细胞而言,空白载体材料具有一定的毒性,其对肿瘤细胞的抑制强度为VDPM2＞VDPM1＞DPM。VDPM2具有更好的肿瘤细胞抑制作用。空白载体在10-400μg/m L的条件下对L02细胞基本无毒。3、体外细胞毒性考察。MTT法检测载药胶束制剂的细胞毒性。与DOX溶液、DOX-DPM及DOX-VDPM1相比,DOX-VDPM2组对4T1和MDA-MB-231细胞均具有更好的肿瘤细胞抑制作用。4、载药胶束制剂的摄取具有时间依赖性,且摄取量高于DOX溶液组。激光共聚焦观察载药胶束被4T1肿瘤细胞摄取后主要集中于溶酶体与细胞核内。5、胶束抗肿瘤作用机制。在空白载体的作用下,在肿瘤细胞中活性氧、钙离子的含量都相较空白对照组有所增加,而在正常细胞中,其均没有发生改变。结论:本实验制备出的载DOX胶束制剂粒径较小,包封率较高。体外释放结果显示其具有p H敏感的性质。细胞毒结果表明,DOX-VDPM2具有更好的抑制肿瘤的效果。胶束对细胞作用机制研究表明,DSPE-PEG主要作用于内质网,引起内质网应激,进而引发氧化应激,从而诱导肿瘤细胞凋亡;VES则为引起氧化应激,进而引起内质网应激,最终导致肿瘤细胞凋亡。二者可联合抗肿瘤药物DOX协同抗肿瘤。
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