【摘 要】
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目的:程序性死亡配体-1（Programmed death ligand-1,PD-L1）和程序性死亡受体（Programmed death-1,PD-1）具有促进或抑制肿瘤的双重作用,本研究探讨食管鳞癌（Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）患者外周血中PD-L1、PD-1和TCF-1 mRNA变化及其在ESCC诊断和预后中的价值。材料与方法:1.收集安
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（81872037）；
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目的:程序性死亡配体-1（Programmed death ligand-1,PD-L1）和程序性死亡受体（Programmed death-1,PD-1）具有促进或抑制肿瘤的双重作用,本研究探讨食管鳞癌（Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）患者外周血中PD-L1、PD-1和TCF-1 mRNA变化及其在ESCC诊断和预后中的价值。材料与方法:1.收集安阳肿瘤医院2019年1月至2019年12月病理确诊的91例ESCC患者术前外周静脉血标本,包括60例男性和31例女性,年龄范围44-80岁（年龄中位数为67±7.41岁）。根据美国癌症联合会与国际抗癌联盟（AJCC-UICC）制定的第8版食管癌TNM分期标准,对淋巴结转移、TNM进行分期。63例非癌对照者血标本来自洛阳市,包括27例男性和36例女性,年龄范围47-86岁（年龄中位数67±8.42岁）,所有非癌对照者在外周血采集后随访12个月以排除此期间确诊的肿瘤患者。2.外周血细胞RNA提取和c DNA反转录:于200μL血细胞中加入800μL Trizol,提取RNA,Nano Drop Lite紫外分光光度计测定OD260/280值;Hi Script II 1 st Strand c DNA Synthesis Kit反转录试剂盒进行反转录合成c DNA。3.实时定量PCR:q RT-PCR使用Ace Q q PCR SYBR Green Master Mix（Q111-02/03）试剂盒,反应体系为20μL,每个样品重复3次。血细胞PD-L1、PD-1和TCF-1 mRNA表达量以GAPDH作为内参基因,用2-ΔΔCt值表示目的基因mRNA的相对表达量。4.统计学分析应用R4.1.0进行统计学分析。外周血细胞PD-L1、PD-1和TCF-1 mRNA表达差异应用两独立样本t检验,Pearson进行相关性分析,χ2检验进行临床病理特征相关性分析。受试者操作特征曲线分析（Receiver operating characteristic curve,ROC）确定最佳界值,曲线下面积（Area under curve,AUC）评估各分子标志物的敏感性和特异性。患者临床病理资料通过安阳肿瘤医院病案管理系统收集,电话随访患者生存信息,末次随访时间为2021年2月,总生存期（Overall survival,OS）为手术日至患者死亡或末次随访时间。Cox单因素、多因素比例风险回归模型分析PD-L1、PD-1和TCF-1和临床病理特征对OS影响。Kaplan-Meier绘制生存曲线,log-rank检验确定不同组别生存曲线差异,检验水准α=0.05。结果:1.ESCC外周血中PD-L1、PD-1和TCF-1 mRNA相对表达量均值分别为5.75±2.50、6.66±2.70和6.50±2.29,显著高于非癌对照组的4.38±2.25、3.54±1.61和4.45±1.15（均P＜0.01）。2.ESCC外周血中PD-L1、PD-1和TCF-1表达水平呈正相关,PD-L1和PD-1相关性系数为0.61,TCF-1和PD-L1、PD-1相关性系数分别为0.62,0.64。3.ROC分析确定ESCC外周血PD-L1、PD-1和TCF-1 mRNA区分ESCC和非癌对照的最佳界值分别为4.52、5.42、5.96;AUC显示ESCC外周血PD-L1、PD-1、TCF-1 mRNA诊断ESCC分别为0.66、0.84、0.78,敏感性和特异性分别为0.58/0.68、0.92/0.64、0.95/0.58。4.ESCC外周血PD-L1、PD-1和TCF-1 mRNA高表达/低表达的ESCC患者分别为60/28、54/31、49/36例,女性ESCC患者外周血细胞PD-1表达高于男性,表达量分别为7.74±3.00、6.10±2.37（P=0.01）,外周血细胞PD-L1、PD-1和TCF-1mRNA与其它临床病理特征无显著相关性。5.根据ROC确定的ESCC外周血PD-L1、PD-1和TCF-1 mRNA区分ESCC高低风险最佳界值分别为3.67、4.74和5.37,PD-L1、PD-1和TCF-1 mRNA高表达/低表达的ESCC患者分别为64/16、57/20和53/22例,PD-L1、PD-1和TCF-1高表达ESCC患者OS明显高于低表达者。6.采用Cox单因素、多因素比例风险回归模型分析影响OS因素,发现PD-L1、PD-1和TCF-1和淋巴结转移是影响ESCC患者预后的的重要因素,但这些因素并不是ESCC的独立预后因素。结论:高表达于ESCC患者外周血PD-L1、PD-1和TCF-1 mRNA是潜在的ESCC诊断和预后标志物分子。
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