自噬是一种以溶酶体为基础的降解过程，其主要功能是降解长寿蛋白质和回收细胞成分。自噬可以分为多种类型，包括大自噬、微自噬和分子伴侣介导的自噬，并且它们的机制和功能各不相同。自噬已被证明可通过选择性和非选择性两种方式降解底物。大自噬和微自噬具有通过选择性和非选择性的机制吞噬大型结构的能力，而分子伴侣介导的自噬只能以选择性的方式降解可溶性蛋白质。一般所说的自噬通常指的是大自噬。大自噬的特征在于其能形成一个称为自噬体的双层膜囊泡。自噬能被多种刺激物诱导，包括营养饥饿，缺氧和多种化学试剂如雷帕霉素。在酵母中，细胞自噬的主要生理功能是调整代谢机制以适应不同的营养状态，从而确保细胞能在一个不断变化的环境中存活。然而，在哺乳动物细胞中，自噬的作用要复杂的多。自噬参与细胞生存、死亡、病原清除和抗原递呈等许多不同的细胞过程。多种疾病与自噬功能异常有关。广泛的研究表明自噬与癌症、神经退行性疾病和慢性炎症之间有着直接联系。尽管自噬在各种疾病种的确切机制有待确定，但调节自噬已成为治疗多种疾病的靶标。柴胡为伞形科多年生草本植物，是中医中常用的药物，有着悠久的使用历史。柴胡中的主要成分为柴胡皂甙(Saikosaponin，SS)，根据柴胡皂甙化学结构的不同，可将其分为柴胡皂甙A、B、C、D、M、N、P和T等。其中以柴胡皂甙D(SSD)的药理活性最强。据报道，柴胡皂甙D具有免疫调节、抗炎、保肝、抗病毒，抗肿瘤等药理作用。基于自噬和柴胡皂甙D均与多种疾病的密切联系，柴胡皂甙D能否诱导细胞自噬成为一个非常有趣并值得探讨的问题。本文以HeLa细胞为模式细胞，对柴胡皂甙D能否诱导细胞自噬及相关机制进行初步研究。首先，我们利用CCK-8法检测柴胡皂甙D对HeLa细胞增殖活性的影响；MDC和AO染色后，分别用荧光显微镜和流式细胞仪检测自噬泡；构建稳定表达pEGFP-LC3质粒的HeLa细胞系，用荧光显微镜观察GFP-LC3斑点；利用免疫印记技术检测自噬标志蛋白LC3-Ⅱ与p62的表达水平。结果显示柴胡皂甙D能显著抑制HeLa细胞增殖，其抑制作用呈时间和剂量依赖性；柴胡皂甙D能够诱导细胞内自噬泡和GFP-LC3斑点增多；能够提高LC3-Ⅱ蛋白表达，促进p62蛋白降解。接下来，我们利用DCFH-DA探针以及荧光酶标仪检测细胞胞内ROS水平；利用免疫印记技术检测细胞蛋白LC3-Ⅱ、JNK和p-JNK的表达水平；并通过ROS抑制剂NAC和JNK抑制剂SP600125研究ROS、JNK和自噬的相互调节作用。结果显示ROS和JNK均参与柴胡皂甙D诱导的HeLa细胞自噬，并且JNK活化受到胞内ROS调节，柴胡皂甙D能够诱导HeLa细胞胞内ROS增多，从而促进JNK磷酸化，导致HeLa细胞发生自噬。本研究结果表明柴胡皂甙D能够通过ROS依赖的JNK活化途径诱导HeLa细胞自噬。这将为柴胡皂甙D的进一步开发应用及新药靶标筛选奠定基础。