论文部分内容阅读
聚乳酸-羟基乙酸共聚物(poly(lactic-co-glycolic acid), PLGA)具有良好的生物相容性、安全性和靶向性修饰等优点,制备成纳米微球后,随着其在体内的逐渐降解,可以释放出其中包载的药物,实现缓慢释药,达到长效给药的目的,是一种良好的药物递送载体。白喉毒素(diphtheria toxin, DT)及其突变体(DT389)对多种肿瘤细胞具有杀伤作用,可以用于治疗肿瘤。微球制备过程中的诸多因素对微球的性质有显著影响,从而进一步影响微球中药物的释放特性。本课题旨在研究PLGA纳米微球的制备工艺对微球药物释放行为的影响以及该纳米微球在肿瘤基因治疗中应用的可能。本论文通过W/O/W乳化溶剂挥发法制备PLGA纳米微球,改变微球的制备参数,包括PLGA组成的单体比例、浓度以及超声时间来制备包载DNA的纳米微球。观察微球表面形态,测定微球包封率及体外释放特性,考察微球对所包载的DNA的酶切保护作用。为进一步探讨PLGA作为基因药物递送载体的应用,MTT法检测空白纳米微球对人脑胶质瘤细胞U251、人胚肾细胞HEK293及人肝癌细胞HepG2的毒性。在以上实验的基础上,构建了pcDNA3.1(-)/DT389质粒,体外检测不同制备条件的PLGA/DT389纳米微球对人脑胶质瘤细胞U251及人肝癌细胞HepG2的作用。扫描电镜图片显示出通过乳化溶剂挥发法制备的微球形态完整,表面光滑无破损。微球包封率随超声时间的延长和PLGA浓度的增加而增加,PLGA单体比例的改变对微球包封率没有影响。体外释放曲线结果表明,微球突释现象随超声时间的延长、PLGA浓度的增加以及PLGA亲水性的降低而降低,各种微球均能够在21d内持续释放其中包载的DNA。酶切保护实验结果表明PLGA纳米微球能够有效保护DNA,免遭核酸酶的降解。为了测定PLGA微球的细胞毒性及其作为基因药物递送载体的性能,我们选取了三种细胞系,进行了MTT检测。MTT实验结果表明,空白PLGA纳米微球对人脑胶质瘤细胞U251、人胚肾细胞HEK293及人肝癌细胞HepG2均无毒。在体外实验中,随着PLGA/DT389纳米微球作用时间的延长和微球中包载质粒浓度的增加,U251细胞和HepG2细胞的存活率呈现下降趋势,具有时间和剂量依赖性,而且释放速率快的微球比释放速率慢的微球抑瘤作用更为显著,表明PLGA/DT389纳米微球对肿瘤细胞具有杀伤作用,其抑瘤活性与DT389从微球内的释放速率直接相关。