制剂处方前研究药物的吸收代谢等生物药剂学性质对于预测药物在体内的动态吸收过程起着关键的指导作用。淫羊藿黄酮具有很好的抗骨质疏松活性，本课题组前期研究表明:淫羊藿黄酮的吸收渗透系数较小，肠道吸收都较差，口服直接以原型的形式吸收很少，在肠道中主要被肠道菌和肠道酶水解为次级苷而易于吸收。但目前研究多以健康大鼠为研究对象，而在骨质疏松病理状态下淫羊藿黄酮的生物药剂学性质是否发生了变化，肠吸收特性、代谢途径等生物药剂学特性是否与健康状态下的结果一致却未见文献报道。文献报道机体对药物的处置过程在病理状态下可能会改变，进而药物的疗效和不良反应也受到影响，而病理状态下研究药物的生物药剂学特性能够更好的模拟临床，更真实的反应在疾病状态下药物的吸收情况，更能呈现生物利用度的问题。因此，本文旨在研究骨质疏松病理状态下的淫羊藿黄酮肠道吸收代谢特性，比较其与健康状态下的差异，为将其研究成高效的抗骨质疏松药物制剂提供生物药剂学研究基础。　　本文采用体外肠道菌和肠黏膜孵育以及在体大鼠肠灌流多种方法，比较了淫羊藿黄酮在骨质疏松病理状态和健康状态大鼠肠道吸收代谢的差异。主要研究内容如下:　　1.离体大鼠肠道菌、肠黏膜孵育样品及大鼠肠灌流样品分析方法学的建立建立了淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、宝藿苷I肠菌孵育和肠黏膜孵育样品的高效液相分析方法，以及淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C大鼠肠灌流样品的超高效液相分析方法。实验结果表明所建方法准确、可靠。　　2.淫羊藿黄酮在健康及骨质疏松病理状态下大鼠肠道菌和肠黏膜中的代谢差异研究　　采用离体大鼠肠菌和肠黏膜孵育法，考察比较了在健康和骨质疏松病理状态下淫羊藿黄酮的代谢差异性。结果均表明:骨质疏松病理组大鼠对淫羊藿黄酮类化合物的代谢作用明显减弱，淫羊藿黄酮在骨质疏松病理状态下的代谢速率比健康状态下慢。　　在用离体大鼠肠菌孵育淫羊藿黄酮时，淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C在健康组孵育1h后分别代谢了65％、63％、59％、51％，而在病理组孵育1h后分别只代谢了46％、37％、40％、37％，且实验以淫羊藿黄酮每个时间点的对数浓度和时间做线性回归方程，斜率的绝对值越大代表代谢速率越快，结果进一步发现病理状态下肠菌孵育时，淫羊藿黄酮类化合物的代谢速率明显降低。不论是健康状态还是骨质疏松病理状态下，淫羊藿黄酮的代谢途径没有变化，均为在肠道菌群的作用下脱掉C-7位的糖基代谢为相应的次级苷，经UPLC/Q-TOF-MS鉴定相应的代谢产物，淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C的代谢产物分别为宝藿苷I、箭藿苷A、箭藿苷B、2"-O-rhamnosylicarisideⅡ。宝藿苷I经肠菌孵育时，在健康和病理状态下均未发生代谢。　　离体大鼠肠黏膜孵育淫羊藿黄酮时，分别刮取大鼠的十二指肠、空肠、回肠和结肠段黏膜与药物进行孵育。不论是在健康状态还是病理状态，淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C主要是被大鼠十二指肠和空肠段的肠道酶水解。孵育1h后，淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C在病理组十二指肠段分别剩余约32％、85％、78％、68％未发生代谢，是健康组十二指肠段孵育相同时间后各化合物剩余含量的大约2.90倍、1.39倍、1.12倍、1.84倍;在空肠段孵育1h后，淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C分别剩余约28％、76％、91％、77％未发生代谢，是健康组空肠段孵育相同时间后各化合物剩余含量的大约1.87倍、1.13倍、1.10倍、2.56倍。孵育1h后，各化合物在病理组回肠段和结肠段几乎未发生代谢。对于宝藿苷I，在健康组及骨质疏松病理组肠黏膜孵育时，在各肠段均未发生代谢，没有代谢产物的生成。经肠黏膜孵育后，朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C的代谢产物与肠菌孵育时一致，淫羊藿苷略有不同，淫羊藿苷的主要代谢产物为脱掉C-7位的葡萄糖基后生成的宝藿苷I，另一个代谢产物推测可能是淫羊藿苷的重排产物，具体结构还需要做1HNMR，13CNMR等加以判断。　　3.实验采用大鼠在体肠灌流法，研究比较了淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C在健康和骨质疏松状态下在体肠吸收特性的差异　　结果显示:淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C在病理组大鼠各肠段的渗透系数和消除百分率与健康组相比，均明显地减小。这几个化合物在大鼠不同肠段的吸收存在差异，其中十二指肠和空肠肠壁渗透系数显著高于回肠段和结肠段。淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C在病理组大鼠十二指肠、空肠、回肠、结肠的表观渗透系数（P*eff值）比健康组各肠段的P*eff值分别减少了约29％～44％、32％～50％、40％～56％、27％～53％;在病理组大鼠十二指肠、空肠、回肠、结肠的消除百分率也比健康组显著地减少，减少的比例几乎与P*eff值的减少比例大体一致。UPLC/Q-TOF-MS鉴定结果得知，朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C肠灌流后的代谢产物与肠菌孵育一致，淫羊藿苷经大鼠肠灌流后的代谢产物与肠黏膜孵育的代谢产物一致。　　4.采用Caco-2细胞模型研究了朝藿定A/B/C的吸收转运机制　　课题组前期系统研究了淫羊藿苷和宝藿苷I的吸收转运特性，并未对朝藿定A/B/C做深入的研究，因此，本课题在前期研究的基础上，又对朝藿定A/B/C的吸收转运机制做了深入的研究。实验考察了维拉帕米、MK571和潘生丁三种不同的抑制剂对朝藿定A/B/C转运的影响。结果显示，加入BCRP的抑制剂（潘生丁）时，朝藿定A/B/C从顶端侧到基底侧的转运明显增加而基底侧到顶端侧的转运显著被抑制。加入P-gp的抑制剂（维拉帕米）时，只有朝藿定A/C有上述结果。这三个化合物吸收渗透系数和分泌渗透系数的显著性差异说明P-gp和BCRP可能参与了朝藿定A/C的转运而朝藿定B的转运可能只有BCRP的参与。由此说明，肠吸收渗透性差和外排转运蛋白(P-gp和BCRP)的参与可能是导致异戊烯基黄酮生物利用度差的主要原因。　　综上所述，不论是在离体还是在体的情况下，淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C在骨质疏松病理状态下的吸收代谢与健康组相比均有显著性的差异。在骨质疏松病理状态下，淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C体外代谢速率，在体肠吸收渗透系数以及消除百分率均比健康组明显降低。推测出现这种现象的原因可能是大鼠摘除双侧卵巢后，导致骨质疏松，相应的肠道菌群的组成和肠道酶数量和活力可能会受影响。病理状态致使相应酶活力不稳定及数量下降，继而影响了肠道菌、肠道酶对淫羊藿黄酮苷的吸收和代谢作用。　　上述研究为淫羊藿黄酮新型高生物利用度制剂的研发提供了生物药剂学研究基础。