论文部分内容阅读
目的：明确哈欠(睡意)与睡眠的相关性并对四逆散冻干粉对哈欠(睡意)与睡眠相关性的干预作用进行研究。方法：1.哈欠模型的复制选取雄性SD大鼠30只,随机分为空白对照组与模型组。两组实验动物在脑立体定位和麻醉条件下,将微量注射导管埋植于其脑内的PVN区域内,术后动物恢复2天,于第三天9：00-13：00,将微量注内管插入导管内,向模型组大鼠脑内PVN区域微量注射0.3μL含有50ng NMDA的林格氏溶液,空白组大鼠给予相同剂量的林格氏溶液,以0.3 μL/min的速度注射1 min,留针1 min后,取出微量注射内管。利用高清录像仪分别记录给药后1h内空白组与模型组大鼠的哈欠次数,复制大鼠哈欠的模型。2.哈欠与睡眠的相关性研究2.1哈欠对大鼠脑内VLPO区神经元中Fos蛋白表达的影响选取雄性SD大鼠30只,随机分为空白对照组与模型组,灌胃给予蒸馏水(10 mL/kg)7天。两组实验动物于第5天在脑立体定位和麻醉条件下,将微量注射导管埋植于其脑内的PVN区域内,术后动物恢复2天,于第8天9：00-13：00,将微量注射内管插入导管内,向模型组大鼠脑内PVN区域微量注射0.3 μL含有50 ng NMDA的林格氏溶液,空白对照组大鼠给予相同剂量的林格氏溶液,以0.3μL/min的速度注射1min,留针1 min后,取出微量注射内管。利用高清录像仪分别记录给药后1h内空白对照组与模型组大鼠的哈欠次数。记录完成后,两组大鼠立即以生理盐水及4%多聚甲醛灌流取脑,经脱水(5%、10%、20%蔗糖溶液)、固定(4%多聚甲醛)、OCT包埋后,用冷冻切片机将大鼠脑组织切片,利用免疫组化技术(SP法)分别测定空白对照组与模型组大鼠脑内VLPO区神经元中Fos蛋白的表达水平。2.2哈欠对大鼠脑内促睡眠相关因子含量的影响选取雄性SD大鼠30只,随机分为空白对照组与模型组,灌胃给予蒸馏水(10 mL/kg)7天。两组实验动物于第5天在脑立体定位和麻醉条件下,将微量注射导管埋植于其脑内的PVN区域内,术后动物恢复2天,于第8天9：00-13：00,将微量注射内管插入导管内,向模型组大鼠脑内PVN区域微量注射0.3μL含有50 ng NMDA的林格氏溶液,空白对照组大鼠给予相同剂量的林格氏溶液,以0.3μL/min的速度注射1min,留针1 min后,取出微量注射内管。利用高清录像仪分别记录给药后1h内空白对照组与模型组大鼠的哈欠次数。记录完成后,立即取大鼠新鲜脑组织,冰水中研磨、匀浆,经低温离心机(3000 r/min, 10min)离心后,取上清液,利用酶联免疫吸附法(ELISA)测定空白对照组与模型组大鼠脑内一氧化氮合酶(NOS)、白介素-2(IL-2)等促睡眠相关因子含量,利用硝酸还原酶法测定两组大鼠脑内一氧化氮(NO)含量。3.四逆散冻干粉对哈欠与睡眠相关性的影响3.1 四逆散冻干粉对哈欠模型大鼠哈欠次数与脑内VLPO区神经元中Fos蛋白表达的影响选取雄性SD大鼠15只,作为给药组,灌胃给予四逆散冻干粉剂(10mL/kg)7天。两组实验动物于第5天在脑立体定位和麻醉条件下,将微量注射导管埋植于其脑内的PVN区域内,术后动物恢复2天,于第8天9：00-13：00,将微量注射内管插入导管内,向给药组大鼠脑内PVN区域微量注射0.3 μL含有50ng NMDA的林格氏溶液,以0.3μL/min的速度注射1 min,留针1 min后,取出微量注射内管。利用高清录像仪分别记录给药后1h内给药组大鼠的哈欠次数。记录完成后,动物立即以生理盐水及4%多聚甲醛灌流取脑,经脱水(5%、10%、20%蔗糖溶液)、固定(4%多聚甲醛)、OCT包埋后,用冷冻切片机将大鼠脑组织切片,利用免疫组化技术(SP法)测定给药组大鼠脑内VLPO区神经元中Fos蛋白的表达水平。3.2 四逆散冻干粉对哈欠模型大鼠脑内促睡眠相关因子含量的影响选取雄性SD大鼠15只,作为给药组,灌胃给予四逆散冻干粉剂(10nL/kg)7天。两组实验动物于第5天在脑立体定位和麻醉条件下,将微量注射导管埋植于其脑内的PVN区域内,术后动物恢复2天,于第8天9：00-13：00,将微量注射内管插入导管内,向模型组大鼠脑内PVN区域微量注射0.3 gL含有50 ng NMDA的林格氏溶液,空白对照组大鼠给予相同剂量的林格氏溶液,以03μL/min的速度注射1 min,留针1 min后,取出微量注射内管。利用高清录像仪分别记录给药后1h内给药组大鼠的哈欠次数。记录完成后,动物立即以生理盐水及4%多聚甲醛灌流取脑,经脱水(5%、10%、20%蔗糖溶液)、固定(4%多聚甲醛)、OCT包埋后,用冷冻切片机将大鼠脑组织切片,利用免疫组化技术(SP法)测定给药组大鼠脑内VLPO区神经元中Fos蛋白的表达水平。结果：1.哈欠模型的复制实验结果表明,与空白组相比,模型组大鼠脑内PVN中注射NMDA后1h内,哈欠次数极显著增加,二者之间存在着极显著的差异(P<0.01)。2.哈欠与睡眠的相关性研究2.1哈欠对大鼠脑内VLPO区神经元中Fos蛋白表达的影响实验结果表明,经7天灌胃给予蒸馏水后,与空白组相比,模型组大鼠脑内PVN中注射NMDA后1h内,哈欠次数极显著增加,二者之间存在着极显著的差异(P<0.01)；实验结果表明,与空白组相比,模型组大鼠脑内PVN中注射NMDA后1 h,VLPO区神经元中Fos蛋白表达量极显著增加,二者之间存在着极显著的差异(P<0.01)2.2哈欠对大鼠脑内促睡眠相关因子含量的影响实验结果表明,与空白组相比,模型组大鼠脑内PVN中注射NMDA后1 h,脑内NO含量极显著增加,二者之间存在着极显著的差异(P<0.01)；脑内NOS含量无明显变化,二者之间无显著的差异(P>0.05)；脑内IL-2含量极显著降低,二者之间存在着极显著的差异(P<0.01)。3.四逆散冻干粉对哈欠与睡眠相关性干预作用的研究3.1四逆散冻干粉对哈欠模型大鼠哈欠次数与脑内VLPO区神经元中Fos蛋白表达的影响实验结果表明,与模型组相比,给药组大鼠脑内PVN中注射NMDA后1h内,哈欠次数显著增加,二者之间存在着显著的差异(P<0.05)；实验结果表明,与模型组相比,给药组大鼠脑内PVN中注射NMDA后1 h,VLPO区神经元中Fos蛋白表达量显著增加,二者之间存在着显著的差异(P<0.05)。3.2四逆散冻干粉对哈欠模型大鼠脑内促睡眠相关因子含量的影响实验结果表明,与模型组相比,给药组大鼠脑内PVN中注射NMDA后1h,脑内NO含量显著增加,二者之间存在着显著的差异(P<0.05)；脑内NOS含量极显著增加,二者之间存在着极显著的差异(P<0.01)；IL-2含量无明显变化,二者之间无显著的差异(P>0.05)。结论：1、哈欠(睡意)与睡眠之间存在着相关性。其相关性表现为：哈欠(睡意)能提高睡眠中枢(VLPO)区域神经元的活性,同时也能提高具有诱导睡眠发生作用的相关因子(NO)的含量。2、四逆散冻干粉能显著地增加哈欠(睡意)的发生,并能提高睡眠中枢(VLPO)区域神经元的活性,同时也能提高具有诱导睡眠发生作用的相关因子(NO、NOS)的含量。