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目的:糖尿病肾脏疾病(diabetic kidney disease,DKD)是糖尿病(diabetes mellitus,DM)的主要微血管并发症之一,其早期的主要临床表现为微量白蛋白尿。近年来大量研究表明,足细胞损伤是导致蛋白尿的主要原因之一,因此成为研究热点。瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(transient receptor potential cation channel,TRPC6)是构成足细胞裂孔隔膜蛋白的主要成分之一,它的表达异常可导致蛋白尿的发生。本课题研究血管紧张素II受体拮抗剂(angiotensinII receptor blockers,ARB)厄贝沙坦对高糖诱导的条件永生化小鼠足细胞TRPC6表达的影响,探讨厄贝沙坦在糖尿病肾脏疾病中保护足细胞的可能机制。方法:首先将体外培养的小鼠足细胞分为五组:分为高渗对照组(甘露醇30mmol/L+葡萄糖5mmol/L),正常对照组(葡萄糖5mmol/L)、实验组(葡萄糖浓度分别为15mmol/L、25mmol/L和35mmol/L),倒置显微镜下观察不同浓度葡萄糖诱导足细胞后的形态学改变,CCK-8检测细胞活力变化,免疫细胞化学检测不同浓度葡萄糖诱导足细胞TRPC6表达分布变化,采用Western印迹法(Western Blot,WB)检测不同浓度葡萄糖诱导足细胞TRPC6蛋白的表达变化,采用反转录-聚合酶链锁反应法(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测不同浓度葡萄糖诱导足细胞TRPC6 mRNA的表达变化。其次高糖(葡萄糖25mmol/L)刺激足细胞,以刺激后0h,12h,24h和48h为时间观察点,每个时间点收集提取的细胞总蛋白和总mRNA,采用WB检测高糖诱导足细胞后在不同时间点引起trpc6蛋白的表达变化,采用rt-pcr法检测高糖诱导足细胞后在不同时间点引起trpc6mrna的表达变化。最后将细胞分为五组:正常对照组、高糖组、高糖+厄贝沙坦组(10-7mol/l)、高糖+厄贝沙坦组(10-6mol/l)、高糖+厄贝沙坦组(10-5mol/l),倒置显微镜下观察不同浓度厄贝沙坦对高糖诱导的足细胞形态学变化,cck-8检测细胞活力变化,采用wb检测不同浓度厄贝沙坦对高糖诱导足细胞48h后引起足细胞trpc6蛋白的表达变化,采用rt-pcr法检测厄贝沙坦对高糖诱导足细胞48h后引起足细胞trpc6mrna的表达变化。统计学分析:应用spss17.0统计软件分析数据。所有的数据都用均数±标准差()来表示,各组之间的数据比较采用单因素方差分析,组内两两比较采用lsdt检验,检验水准α=0.05,p<0.05表明有统计学意义。结果:1.随着葡萄糖浓度的增加,光镜下足细胞胞体明显变小,足突明显减少或消失;cck-8检测到葡萄糖25mmol/l时对细胞活力的抑制作用最明显;免疫细胞化学可见随着葡萄糖浓度的增加,trpc6主要集中表达于足细胞胞膜,沿足突分布更加明显;wb和rt-pcr检测到trpc6蛋白和mrna表达量逐渐增加,以25mmol/l变化最明显。2.高糖刺激足细胞后,与0h相比,随着刺激时间的延长,足细胞trpc6蛋白和mrna表达量明显增加(p<0.05),在48h达到高峰,呈一定的时间依赖性。3.与正常对照组相比,高糖诱导的trpc6表达明显上调(p<0.05),与高糖组相比,高糖+厄贝沙坦组随厄贝沙坦浓度的增加,trpc6蛋白和mrna表达量明显下调(p<0.05),呈剂量依赖性。结论:高糖能够使足细胞trpc6表达上调,厄贝沙坦对高糖诱导的足细胞损伤具有保护作用,其机制可能是通过下调足细胞trpc6的表达来实现的。