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猪流行性腹泻(Porcine Epidemic Diarrhea, PED)是由猪流行性病毒(PEDV)引起的具有毁灭性的一种猪的高度接触性肠道传染病,临床上主要以食欲下降、呕吐、严重腹泻、脱水,最后酸中毒为基本特征,各年龄阶段的猪都易感染,尤其以哺乳仔猪最为严重,通常死亡率可达到100%,给养猪业造成了巨大的经济损失。近几年来,本病在四川省的发生明显增多,因此,本研究旨在从四川地区分离猪流行性腹泻病毒,对分离的病毒进行鉴定,并对分离到的毒株进行基因的克隆和序列分析,为猪流行性腹泻的流行病学调查和分类研究提供素材,并为有效地防控猪流行性腹泻提供理论依据。1.猪流行性腹泻SC-L株的分离鉴定从四川发生腹泻的多个猪场采集仔猪腹泻粪便和因腹泻而死亡仔猪的小肠及内容物20余份,将病料常规处理后接种VERO细胞,并在DMEM细胞维持营养液中加入5μg/ml的胰酶,细胞盲传至第四代,接种采集于大邑某猪场病料的细胞开始肿胀,变圆,细胞间的间隙变大,逐渐的细胞脱落,疑似为PEDV病变,随着传代代数增加,细胞病变逐渐稳定。随后对所分离的病毒进行PCR鉴定,可扩增出M基因的高保守区,电镜超微结构可观察到VERO细胞胞浆中积聚了大量成熟和未成熟的病毒颗粒,病毒颗粒呈球形,130nm左右。病毒的核酸类型实验证明分离到的病毒为RNA病毒;TCID5o为10-4.33/0.05ml；理化性质测定实验证明所分离的病毒对脂溶剂乙醚和氯仿敏感,在pH3.0的环境下不稳定,易失活,对热也比较敏感,在50℃条件下1h,便可将其灭活。将本试验所分离到的病毒命名为SC-L株。2.猪流行性腹泻SC-L株S基因和N基因的序列分析用RT-PCR技术扩增出猪流行性腹泻病毒SC-L株的S2基因和N基因,并将所扩增的片段插入pMD19-T载体,构建了重组质粒pMD-S2和pMD-N。核苷酸测序结果显示S2基因的长度为1925bp,将S2基因的核苷酸序列和本实验室已测序保存的S1基因的核苷酸序列用生物学软件分析后,去掉重复的序列,将其余部分进行拼接,拼接后的S基因片段长4117bp,编码1371个氨基酸,N基因的长度为1281bp,编码426个氨基酸。利用DNAMNA进行分析,S基因和N基因与其他地方毒株的核苷酸与氨基酸序列有同源性,系统进化分析表明,S基因与CV777株的亲缘关系较近,N基因与HLJBY株的亲缘关系较近。